Содержание

Платежная система Contact работает в Таджикистане в штатном режиме — Экономика и бизнес

МОСКВА, 3 декабря. /ТАСС/. Платежная система Contact опровергла информацию о приостановке денежных переводов в Таджикистан. Сейчас система работает в штатном режиме без перебоев, говорится в пресс-релизе компании.

Во вторник издание РБК сообщило, что переводы в Таджикистан приостановили Western Union, Contact и «Близко», тогда как Unistream, MoneyGram и «Золотая корона» продолжают проводить операции. При этом в понедельник в Нацбанке Таджикистана заявляли, что Unistream, Western Union и Contact уже подписали соответствующие соглашения и подключились к процессинговому центру.

Позже в пресс-службе Национального банка Таджикистана ТАСС уточнили, что платежные системы Unistream, Western Union и Contact подключились к запущенному во вторник Национальному процессинговому центру. Переводы через Contact будут доступны во вторник во второй половине дня, а через Western Union — в течение одного-двух дней.

«Подключение к Национальному процессинговому центру было произведено в срок и согласно таймингу, разработанному с коллегами из Национального банка Таджикистана. Это была непростая задача, поскольку данная система не имеет аналогов на территории СНГ, но мы справились с ней и в полной мере продолжаем работу на территории республики», — сообщил руководитель платежной системы Contact Сергей Нестеров, чьи слова приведены в пресс-релизе.

Национальный процессинговый центр был создан для повышения эффективности системы денежных переводов и прозрачности операций, а также минимизации операционных рисков. Функционирование центра направлено на обеспечение стабильности финансово-банковского сектора и создание предпосылок для безопасных денежных переводов в стране.

По информации Нацбанка Таджикистана, в результате переговоров с иностранными платежными системами комиссия на значительную (около 80%) часть объема денежных переводов снизилась с 1,5% до 1,0%, что существенно сокращает затраты отправителей и получателей денежных переводов. НБТ также уверяет всех участников рынка платежных систем, что в процессе создания НПЦ были максимально учтены интересы всех заинтересованных сторон.

Naumen Contact Center — высокая надежность, доступная цена, любые задачи

Naumen Contact Center — комплексное программное решение, содержащее все необходимое для организации корпоративного или аутсорсингового контакт-центра. Создавая call center на базе нашего решения, вам не придется тратиться на интеграцию и поддержку продуктов от разных поставщиков, поскольку в Naumen Contact Center есть все, что необходимо для эффективной работы.

В состав решения входит коммуникационная платформа с компонентом Omni-Channel, обеспечивающая работу телефонии, а также прием и обработку обращений по другим каналам: e-mail, SMS, мессенджеры, соцсети, звонки с сайта, чат на сайте и в мобильном приложении.

С точки зрения функциональности, надежности, гибкости, масштабируемости и уровня техподдержки платформа Naumen Contact Center соответствует высоким требованиям корпоративного сегмента. Решение использует SIP-протокол, что позволяет подключать VoIP-шлюзы и абонентские терминалы различных производителей, предоставляя полную свободу выбора серверного и телекоммуникационного оборудования.

Серверная часть NСС работает на базе свободно распространяемого ПО: ОС Linux, а в качестве СУБД может быть использован PostgreSQL или Oracle. На рабочих местах допускается использование разных операционных систем Windows, Linux и MacOS.

Технологическая зрелость платформы Naumen Contact Center подтверждена многочисленными победами в рамках престижных профессиональных конкурсов, среди которых 8 наград конкурса «Хрустальная Гарнитура» в номинациях «Продукт года», «Лучший продукт», «Лучшее применение технологий», и др. По данным независимых исследований РБК Research и IKS Consulting начиная c 2014 года NAUMEN занимает лидирующие позиции по количеству внедренных решений в сегменте аутсорсинговых контактных центров, опережая Avaya, Cisco и Genesys. Помимо ведущих аутсорсинговых контакт-центров решения на платформе NAUMEN используют многие крупные компании, среди которых Ростелеком, Почта России, Мосэнергосбыт, ОТП Банк, Банк РОССИЯ, ЭРА ГЛОНАСС, Ягуар Лэндровер, Спортмастер, СТД Петрович, Сбербанк АСТ, Belka Car и другие известные бренды.

Россия потеряла Contact с Украиной – Газета Коммерсантъ № 105 (6343) от 20.06.2018

Служба безопасности Украины (СБУ) раскрыла схему обхода санкций, к которой прибегла одна из российских систем денежных переводов для предоставления услуг на территории страны. Как выяснил “Ъ”, речь идет о системе Contact, которая еще до недавнего времени предлагала услугу переводов на Украину на своем сайте. Помогала ей в этом международная система Tyme, у которой в результате Национальный банк Украины (НБУ) отозвал лицензию.

СБУ установила факт обхода антироссийских санкций, запрещающих денежные переводы на территории Украины, со стороны одной из систем РФ. Из сообщения службы следует, что российская платежная система использовала для этого международную систему Tyme. Доказательства СБУ передала НБУ, а финансовый регулятор на днях отозвал у Tyme лицензию. Какой платежной системе и как помогала Tyme, в СБУ не уточнили.

Украина ввела санкции против российских платежных систем в октябре 2016 года. Возможности работать на Украине лишились системы «Колибри», «Золотая корона», «Юнистрим», «Лидер», Anelik и Blizko. Весной 2017 года Россия ввела ответные санкции и запретила денежные переводы на Украину через иностранные платежные системы. В мае 2018 года Киев расширил санкционный список — под ограничения попали Webmoney и Contact.

Как выяснил “Ъ”, переводы на Украину в обход санкций совершала система Contact, до недавнего времени эта информация содержалась на ее сайте, о чем сейчас свидетельствуют только сохраненные копии в поисковых системах. Contact принадлежит группе Qiwi. Она же с 2011 по 2013 год владела финансовой компанией ОМП-2013, которая распоряжается брендом международной платежной системы Tyme. В марте 2018 года Tyme стала крупнейшей системой денежных переводов на Украине и получила статус социально значимой. В России также есть система Tyme со сходным логотипом, которая называет Qiwi партнером.

В то же время в пресс-службе работающей в России Tyme “Ъ” заявили, что они не имеют никакого отношения к украинской. На вопрос “Ъ”, осуществляла ли Contact переводы на Украину через Tyme для обхода санкций, в пресс-службе Contact ответили, что эту информацию «подтвердить не могут». Переводы из РФ на Украину и в обратном направлении «посредством Contact» не осуществлялись, сказали там. Что касается переводов из стран дальнего зарубежья на Украину, то они осуществлялись Contact «в рамках сотрудничества с партнерами из дальнего зарубежья» (добавлено после выхода заметки.— “Ъ”). Пресс-служба СБУ не ответила на запрос “Ъ”.

По словам собеседников “Ъ” на платежном рынке, чтобы обойти украинские и российские санкции, в схеме помимо российской и украинской платежной систем должен был быть задействован игрок из третьей страны. Один из собеседников “Ъ” считает, что схема могла выглядеть так: российская платежная система «собирает» платежи на Украину, а затем передает их сторонней платежной системе. Та, в свою очередь, направляет их платежной системе, работающей на Украине. Последняя, в случае подозрений со стороны НБУ, могла бы указать на нероссийское происхождение средств.

У Contact были партнерские отношения с грузинской системой денежных переводов Intel Express. Они завязались еще до введения санкций, когда у Contact были перебои с осуществлением переводов на Украину, связанные с отзывом лицензии у ее расчетного центра (на тот момент) — РСБ 24 (Русславбанка). Он был единственным расчетным центром платежной системы, зарегистрированным в НБУ. Именно для решения этой проблемы в 2015 году Contact стала партнером Intel Express, которая и выдавала собранные российской платежной системой переводы на Украине.

Источники “Ъ” допускают, что Intel Express могла быть задействована в схеме по обходу санкций как третья сторона. Связаться с представителями грузинской системы не удалось. В НБУ на вопрос о возможном участии в схеме обхода запрета на переводы на Украину из России Intel Express “Ъ” сообщили, что «в случае несоблюдения платежными системами соответствующих ограничений после вынесенного предупреждения» примут «меры воздействия, как в случае с Tyme». НБУ предупреждал все платежные системы о недопустимости сотрудничества с платежными системами, к которым Украина применила санкции, подчеркнули в НБУ, а также взаимодействия с указанными платежными системами через другие платежные системы и организации независимо от их юрисдикции.

Виталий Солдатских

Система Contact вышла на рынок денежных переводов Японии

Интеграция ИТ в банках | Поделиться

Платежная система Contact предоставила своим клиентам возможность совершать денежные переводы в Японии. Об этом CNews сообщили в «Русславбанке», который является основателем системы Contact, а также выполняет для нее функции расчетного центра.

Таким образом, клиенты системы по всему миру теперь могут отправлять денежные переводы в Японию с выплатой в японских йенах наличными или доставкой чека по адресу получателя. Комиссия составляет 1,5% от суммы перевода + $/?15 вне зависимости от формы выплаты. Валюта отправки для выплаты наличными — доллары США, а для доставки чека по адресу получателя — евро. Точную сумму выплаты наличными можно узнать в пункте отправки.

Перевод доступен к выдаче через 15 минут после отправки. В случае выплаты чеком конверсия производится по курсу на дату, следующую за датой отправки перевода. Сроки доставки чека по адресу получателя: при отправке денежного перевода по системе Contact до 10:00 CET через 3 рабочих дня (после 10:00 СЕТ — через 4 рабочих дня) Japan Post направит извещение (чек) о поступлении денежного перевода по адресу получателя, указанному в платежном поручении.

Чек может быть обналичен в любом отделении Japan Post, оказывающем финансовые услуги, в течение 30 дней после даты выпуска чека (указывается на почтовом штемпеле) при предъявлении чека и документа, удостоверяющего личность.

Помимо получения денежных переводов, клиентам Contact также доступен сервис отправки перевода из Японии в РФ и страны СНГ через веб-сайт партнера системы Contact — телекоммуникационного оператора Brastel.

Татьяна Короткова

Министерство цифрового развития, связи и массовых коммуникаций Российской Федерации

Специалисты EastWind завершили работы по внедрению центра обработки вызовов EastWind Contact Center в сети оператора СМАРТС «Астрахань GSM».

EastWind Contact Center стал для СМАРТС «Астрахань GSM» удобным инструментом для оптимизации работы абонентской службы и повышения уровня лояльности клиентов. Решение EastWind позволило увеличить скорость обработки массового потока обращений, снизить нагрузку на консультантов абонентского отдела и индивидуализировать  работу с клиентами.

После внедрения EastWind Contact Center оператор получил возможность применять при общении с абонентами индивидуальный подход.  Персонификацию обеспечили особая реализация механизмов маршрутизации и распределения вызовов, а также  ведение истории обращений клиентов в контакт-центр.

EastWind Contact Center позволяет объединять сотрудников абонентского отдела в группы в соответствии с их навыками и знаниями. Звонки, поступающие в контакт–центр, сначала маршрутизируются на группу операторов, а затем распределяются внутри неё с учетом динамики загруженности консультантов.

Система контакт-центра хранит всю информацию об обращениях клиентов и позволяет сотрудникам использовать её в дальнейшей работе. При поступлении вызова на мониторе оператора появляются данные о времени, дате и характере вопросов, с которыми абонент ранее обращался в контакт-центр.

Для того чтобы свести к минимуму количество пропущенных обращений, в системе предусмотрена функция Call Back. В случае, когда временной порог ожидания ответа оператора превышает  заданную норму, система предлагает абоненту прервать вызов и дождаться ответного звонка из контакт-центра.

Персонифицированный подход в общении с клиентами, а также возможность ответить практически на все запросы вне зависимости от динамики загруженности контакт-центра, должны, по мнению специалистов оператора, укрепить доверие абонентов и дополнить конкурентные преимущества компании СМАРТС «Астрахань GSM».

центр | Министерство по налогам и сборам Республики Беларусь

б) доходы по трудовым договорам (контрактам) от резидентов Парка высоких технологий, Китайско-Белорусского индустриального парка «Индустриальный парк «Великий камень», а также иные доходы, облагаемые по ставке в размере 9 процентов

б) доходы по трудовым договорам (контрактам) от резидентов Парка высоких технологий, Китайско-Белорусского индустриального парка «Великий камень», а также иные доходы, облагаемые по ставке в размере 9 процентов

б) доходы, полученные по трудовым договорам (контрактам) от резидентов ПВТ, Китайско-Белорусского индустриального парка «Великий камень», иные доходы, облагаемые по ставке 9%

б) доходы, полученные по трудовым договорам (контрактам) от резидентов ПВТ, Китайско-Белорусского индустриального парка «Великий камень»

Контактная система — PubMed

Цели: Изучить литературу по состояниям, заболеваниям и расстройствам, которые влияют на активность контактных факторов, а также изучить литературу на предмет доказательств того, что меньшая, чем обычно, активность любого из контактных факторов может быть связана с тромбофилией.

Источники данных: MEDLINE выполняет поиск англоязычных статей, опубликованных с 1988 по 2001 год, и соответствующих ссылок, содержащихся в них, а также поиск ссылок в недавних соответствующих статьях и обзорах.

Выбор исследования: Соответствующая клиническая и лабораторная информация была извлечена из выбранных статей. Мета-анализ был невозможен из-за неоднородности отчетов.

Извлечение и синтез данных: Были исследованы доказательства связи измененных уровней контактных факторов и тромбофилии.Большое разнообразие нарушений связано со снижением активности контактных факторов; Основными среди этих заболеваний являются заболевание печени, незрелость печени у новорожденных, антифосфолипидный синдром, а для фактора XII — азиатское происхождение. Эти нарушения встречаются чаще, чем гомозиготный дефицит. Немногочисленные серии и отчеты о случаях тромбофилии у пациентов, гомозиготных по дефициту контактных факторов, недостаточно убедительны, чтобы подтвердить причинно-следственную связь. Очевидная связь между уровнями, соответствующими гетерозиготности (40-60% от нормы) любого из контактных факторов (но особенно фактора XII) у лиц с антифосфолипидными антителами, по-видимому, связана с ложно сниженными уровнями активности этих факторов in vitro, которые являются нормальными при антигенном тестировании.Очевидная связь с тромбозом лучше объясняется антифосфолипидным синдромом, чем умеренным снижением уровней контактных факторов.

Выводы: В настоящее время не рекомендуется измерять активность контактных факторов при рутинном обследовании пациентов, перенесших венозную или артериальную тромбоэмболию или острый коронарный синдром.

Контактная система

: модулятор сосудистой биологии с антикоагулянтными, профибринолитическими, антиадгезивными и провоспалительными свойствами | Кровь

Система КАЛЛИКРЕИН-КИНИН была впервые признана протеолитической системой плазмы и тканей, ответственной за высвобождение вазоактивного провоспалительного медиатора брадикинина (ВК).1 BK, нонапептид, высвобождаемый из кининогенов калликреинами, может воспроизводить многие характеристики воспалительного состояния, такие как изменения местного кровяного давления, отек и боль, что приводит к расширению сосудов и повышенной проницаемости микрососудов. В 1975 году у трех человек был описан дефицит высокомолекулярного кининогена (HK), предшественника BK, у всех из которых было продленное активированное частичное тромбопластиновое время (APTT), тест скрининга поверхностно-активированного белка свертывания крови.2-4 Несмотря на то, что ни у одного из этих людей не было геморрагического состояния, исследования калликреин-кининовой системы плазмы были сосредоточены на определении прокоагулянтных свойств HK. Фактически, уже было известно, что дефицит двух зимогенов, фактора XII и прекалликреина, необходимых для ферментативного расщепления HK, также не приводит к кровотечению. Эти белки плазмы вместе были сгруппированы как контактная система, потому что они требовали контакта с искусственными отрицательно заряженными поверхностями для активации зимогена.За последние 20 лет было показано, что эти белки мало влияют на гемостаз. Однако изучение их молекулярных, биохимических, биологических и физиологических свойств показало, что эти белки взаимодействуют с рядом физиологических и патофизиологических систем. Клонирование и определение их взаимосвязей между структурой и функцией показали новые активности этих белков, такие как ингибирование протеаз, функция антитромбина и антиадгезивные свойства. Их специфические взаимодействия с биологическими мембранами эндотелиальных клеток, тромбоцитов, нейтрофилов и моноцитов указывают на то, что сборка и активация этой системы происходит в физиологической среде, независимо от отрицательно заряженных поверхностей.Фактически, правильно сказать, что так называемая неуловимая физиологическая отрицательно заряженная поверхность для активации контактной системы на самом деле является сборкой этих белков на клеточных мембранах. In vivo отрицательно заряженная поверхность не нужна для активации. Кто-то может возразить, что термин «контактная активация» — неправильное употребление для описания этой системы. Белки системы контакта с плазмой обладают антикоагулянтной, профибринолитической, антиадгезивной и провоспалительной функциями. В этом обзоре представлен обновленный взгляд на контактную систему как физиологический посредник сосудистой биологии и воспалительных реакций.Сначала мы рассмотрим текущие знания о структуре и функциях каждого из белков системы: HK, прекалликреина и фактора XII. Далее мы опишем, как эта система собирается на клеточных мембранах. Участие этих белков в различных биологических действиях (например, регуляция артериального давления, ингибирование активации тромбина клеток, клеточный фибринолиз и антиадгезия) затем будет охарактеризовано с точки зрения их сборки и активации на клеточных мембранах. Кроме того, мы опишем как клинические примеры, так и экспериментальные модели, в которых эта система активирована.Цель этого обзора — прояснить вклад этой системы в физиологические и патофизиологические реакции сосудистой биологии. Наконец, эта презентация укажет на возможные новые терапевтические стратегии для лечения различных заболеваний, возникающих на основе знания этой системы в физиологических и патофизиологических состояниях.

Экспрессия и регуляция генов . Две формы кининогенов плазмы, HK и низкомолекулярный кининоген (LK), являются продуктами одного гена.5,6 Этот ген отображается на 3q26-qter, где расположены гомологичный HS-гликопротеин α 2 и гликопротеин, богатый гистидином. 7-9 Один ген кининогена из 11 экзонов, состоящих из 27 т.п.н., продуцирует уникальную мРНК для HK и LK путем альтернативного сплайсинга (рис. 1) .6 HK и LK разделяют кодирующую область первых девяти экзонов, часть экзона 10, содержащую последовательность BK, и первые 12 аминокислот после карбоксиконцевой последовательности BK. Экзон 11 кодирует уникальную легкую цепь длиной 4 кДа LK. Полный экзон 10 содержит полную кодирующую последовательность уникальной легкой цепи 56 кДа HK.Новый механизм альтернативного процессинга РНК был охарактеризован в гене кининогена крысы.10 Эффективность сплайсинга контролируется взаимодействием малых ядерных рибонуклеопротеидов U1 и дополнительных повторяющихся последовательностей малой ядерной РНК (мяРНК) U1 пре-мРНК кининогена. Размер мРНК для LK и HK составляет 1,7 и 3,5 т.п.н. соответственно.

Рис. 1.

Доменная структура кининогенов. Кининогены продуцируются одним геном с 11 экзонами (E1-E11).E1-E3 кодирует домен 1 (D1) как на HK (высокомолекулярный кининоген), так и на LK (низкомолекулярный кининоген). Части домена 1 ингибируют предсердный природный фактор. E4-E6 кодирует домен 2 (D2), который содержит папаин и уникальные ингибирующие последовательности кальпаина. E7-E9 кодирует домен 3 (D3), который имеет последовательности, ингибирующие папаин. Домен 4 (D4) кодируется частью E10; это последовательность брадикинина кининогенов и первых 12 аминокислот легких цепей HK и LK. Остальная часть E10 кодирует легкую цепь HK, которая состоит из домена 5 (D5 H ) и домена 6 (D6 H ).D5 H — искусственная поверхность связывания; D6 H имеет области связывания прекалликреина и фактора XI. Домены 3, 4 и 5 на HK также участвуют в связывании клеток. E11 кодирует остаток уникальной легкой цепи LK (D5 L ).

Рис. 1.

Доменная структура кининогенов. Кининогены продуцируются одним геном с 11 экзонами (E1-E11). E1-E3 кодирует домен 1 (D1) как на HK (высокомолекулярный кининоген), так и на LK (низкомолекулярный кининоген).Части домена 1 ингибируют предсердный природный фактор. E4-E6 кодирует домен 2 (D2), который содержит папаин и уникальные ингибирующие последовательности кальпаина. E7-E9 кодирует домен 3 (D3), который имеет последовательности, ингибирующие папаин. Домен 4 (D4) кодируется частью E10; это последовательность брадикинина кининогенов и первых 12 аминокислот легких цепей HK и LK. Остальная часть E10 кодирует легкую цепь HK, которая состоит из домена 5 (D5 H ) и домена 6 (D6 H ). D5 H — искусственная поверхность связывания; D6 H имеет области связывания прекалликреина и фактора XI.Домены 3, 4 и 5 на HK также участвуют в связывании клеток. E11 кодирует остаток уникальной легкой цепи LK (D5 L ).

Молекулярная основа одного из примеров гомозиготной недостаточности общего кининогена, признак Вильямса, была определена.11 Произошел переход от AC к T в нуклеотиде 587, в результате чего кодон CGA (Arg) изменился на мутацию TGA (Stop) в экзоне 5, что привело к предотвращению синтеза как HK, так и LK.11 Фенотип этого дефекта аналогичен фенотипу, наблюдаемому у крыс линии Brown-Norway, Katholiek, у которых отсутствуют кининогены плазмы, но дефект у крыс вызван единственной точечной мутацией Ala 163 в Thr, которая приводит к дефектному секреция из печени.12 Мало что известно о том, что регулирует экспрессию генов кининогенов. У крыс овариэктомия приводит к снижению транскриптов кининогена в печени, тогда как эстрогены повышают уровни мРНК кининогена.13 Этот результат согласуется с клиническим наблюдением, что концентрация HK увеличивается во время беременности.14 Напротив, лечение прогестероном снижает экспрессию гена кининогена, что приводит к небольшому снижению уровней кининогена в плазме.15 Фибробласты мыши синтезируют и секретируют кининогены в ответ на циклический АМФ, форсколин, простагландин E 2 и фактор некроза опухоли α.15 Сходным образом, фактор некроза опухоли α, как было установлено, увеличивает экспрессию кининогена в клетках HEP G2.16 Мало что еще известно о влиянии на уровни кининогена, только потому, что этот аспект кининогенов не был широко изучен.

Белковая химия и структура кининогенов . Две мРНК кининогенов кодируют два отдельных белка. LK представляет собой β-глобулин массой 66 кДа с концентрацией в плазме 160 мкг / мл (2,4 мкмоль / л) и изоэлектрической точкой 4,7,17,18. HK представляет собой α-глобулин массой 120 кДа с концентрацией в плазме 80 мкг. / мл (0,67 мкмоль / л) и изоэлектрическая точка 4.3.18,19 Печень человека является источником кДНК для обоих кининогенов, 5,6 но эндотелиальные клетки пупочной вены человека содержат мРНК HK и синтезируют белок. .20 Антиген кининогена также был обнаружен в тромбоцитах, гранулоцитах, клетках почечных канальцев и коже. 19-24 LK до своего клонирования был также известен как ингибитор α 1 -цистеиновой протеазы.25 И HK, и LK состоят из шаровидные единицы. LK-гель фильтрует при 66 кДа и ведет себя как настоящий глобулярный белок; HK, хотя и 120 кДа, гелевые фильтры на 220 кД, что указывает на высокое осевое отношение. Физические доказательства того, что HK представляет собой комплекс глобулярных единиц, было получено с помощью электронно-микроскопических исследований. 26 На электронной микроскопии HK представлял собой линейный массив из трех связанных централизованных глобулярных областей с двумя тонкими концами.26 Расщепление HK калликреином плазмы приводит к поразительному изменению конформации HK. Центральная глобулярная область отделяется после высвобождения брадикинина и перестраивается с областью, ингибирующей цистеиновые протеазы, противоположной области связывания прекалликреина. 26 Области кининогенов делятся на домены (Рис. 1). Разделение этих доменов представляет собой чувствительные к сериновой протеазе области 27–29. Как будет обсуждаться ниже, смежность определенных доменов важна для некоторых биологических функций кининогенов, таких как ингибирование кальпаина и связывание HK и LK с эндотелиальными клетками.30-32 С другой стороны, протеолитическое расщепление HK выявляет новую функцию, то есть его клеточную антиадгезивную активность.33 Конечно, основная активность кининогенов, которая заключается в доставке брадикинина, — это запрограммированное разрушение белка, потому что брадикинин не активен как биологический пептид, если он не высвобождается из его предшественника.

Доменная структура кининогенов . Кининогены представляют собой белки, состоящие из нескольких доменов, каждый из которых имеет ассоциированную активность (рис. 1).Связывание кининогена с его клеточными рецепторами способствует высвобождению брадикинина в ограниченной среде, в которой пептид может связываться с рецепторами брадикинина и влиять на местную клеточную среду. Таким образом, можно рассматривать каждую функцию доменов кининогенов как участие в активности доставки кининов целого белка. Кининогены, в общем, можно разделить на три части: тяжелая цепь, которая является общей для HK и LK, фрагмент брадикинина и легкие цепи, которые, как уже говорилось, являются уникальными для HK и LK, соответственно (рис. ).Домены с 1 по 3 составляют тяжелую цепь кининогенов. Домен 4 — это брадикининская область. Домен 5 для LK (D5 L ) представляет собой его уникальную легкую цепь длиной 4 кДа. Домены 5 и 6 HK (D5 H или D6 H ) уникальны для этого белка и включают его легкую цепь.

Мало что известно о функции домена 1, за исключением того, что он имеет сайт связывания кальция с низким сродством, роль которого неизвестна.34 Хотя ионы кальция важны для активации форбол-12-миристат-13-ацетата LK и связывания тяжелых цепей с эндотелиальными клетками, 35 нет убедительных доказательств того, что ионы кальция участвуют в связывании HK с клетками, 31,36 вопреки данным других лабораторий. .37,38 Недавние данные также показывают, что пептид из домена 1 ингибирует предсердный природный пептид.39 Домены 2 и 3 содержат высококонсервативную аминокислотную последовательность QVVAG, обнаруженную в ингибиторах цистеиновых протеаз (рис. 2) .27 И LK, и HK являются мощные, прочно связывающиеся, обратимые ингибиторы цистеиновых протеаз с K и s, равными 2 и 0.5 нмоль / л, соответственно, тромбоцитарного кальпаина.18,40 Ингибирующая область кальпаина кининогенов обнаруживается исключительно в домене 2 28,30,40,41 , тогда как папаин и катепсин L эффективно ингибируются областями на обоих доменах 2 и 3.27,30,42,43 Компьютерные трехмерные модели домена 2 были построены с использованием рентгеновских кристаллографических координат цистатина, который на 50% идентичен доменам 2 и 3,30. Пептиды из домена 2 HK были отобраны и окислены воздухом с образованием петли с дисульфидной связью.Пептид, содержащий Q 170 VVAG 174 , блокировал HK-ингибирование кальпаина и, таким образом, функционировал как сайт связывания (фиг. 2). Другой пептид (C211-C229), С-конец по отношению к этому пептиду, был прямым ингибитором кальпаина (IC 50 = 35 мкмоль / л). Эти две области, вероятно, образуют непрерывный сайт связывания в трехмерной структуре кининогенов (рис. 2). Третий пептид (V128-L138), N-концевой по отношению к области QVVAG, ингибировал папаин, но не кальпаин, что указывает на то, что сайты ингибирования в домене 2 для этих двух цистеиновых протеаз не идентичны (рис. 2).Напротив, для оптимального ингибирования катепсина B и H требуются три петли домена 3 (рис. 2) .43 Несмотря на то, что они являются ингибитором цистеиновых протеаз, кининогены также являются субстратами этого класса ферментов при молярном избытке фермента по отношению к ингибитору18. , 44,45 Поскольку кининогены являются внеклеточными или находятся внутри гранул в тромбоцитах и ​​гранулоцитах, было неясно, как они взаимодействуют с клеточными цистеиновыми протеазами, которые, по большей части, находятся на внутренней мембране или в цитозоле. тромбоциты активируются, кальпаин перемещается на внешнюю мембрану, в которой он может быть ингибирован плазмой или внешней α-гранулой тромбоцитов HK.45-47

Рис. 2.

Структура высокомолекулярного кининогена. Диаграмма аминокислотной последовательности высокомолекулярного кининогена. Круг с тонкими вертикальными линиями представляет собой область ингибирования папаина. Круг с тонкими горизонтальными линиями представляет собой область ингибирования кальпаина. Круг со сплошным фоном представляет собой связывающий домен на клеточной поверхности. Круг с толстыми вертикальными линиями представляет перекрывающуюся активность ингибирования папаина и активность связывания с клеточной поверхностью.Круг с толстыми горизонтальными линиями представляет брадикинин. Круг с пустым фоном представляет домен связывания фактора XI. Круг с заштрихованным фоном представляет собой перекрывающийся прекалликреин и связывающий домен фактора XI.

Рис. 2.

Структура высокомолекулярного кининогена. Диаграмма аминокислотной последовательности высокомолекулярного кининогена. Круг с тонкими вертикальными линиями представляет собой область ингибирования папаина. Круг с тонкими горизонтальными линиями представляет собой область ингибирования кальпаина.Круг со сплошным фоном представляет собой связывающий домен на клеточной поверхности. Круг с толстыми вертикальными линиями представляет перекрывающуюся активность ингибирования папаина и активность связывания с клеточной поверхностью. Круг с толстыми горизонтальными линиями представляет брадикинин. Круг с пустым фоном представляет домен связывания фактора XI. Круг с заштрихованным фоном представляет собой перекрывающийся прекалликреин и связывающий домен фактора XI.

Домен 3 кининогенов выполняет другие функции.Обнаружение того, что LK и его изолированная тяжелая цепь связываются с тромбоцитами и эндотелиальными клетками, указывает на то, что на тяжелой цепи кининогенов имеется участок связывания клеток.35,48,49 Этот момент был подтвержден прямыми исследованиями с использованием изолированного и рекомбинантного домена 3, который содержал область связывания клетки тяжелой цепи на тромбоцитах50 и нейтрофилах.51 Используя компьютеризированную модель домена 3, также основанную на структуре кристаллизованного цистатина, 52 была нарисована последовательная аминокислотная структура домена 3, чтобы показать три открытых участка: дисульфидная петля, соединяющая его к домену 2 и двум шпилькам (рис. 2).Область, ингибирующая цистеинпротеазу домена 3, состоит из частей этих трех открытых петель. Используя синтетические пептиды этих открытых участков, K 244 ICVGCPRDIP 254 (KIC11), N 276 ATFYFKIDNVKKARVQVVAGKKYFI 301 (NAT26) и L 331 DCNAEVYVVPWEKKIY 301 (NAT26) и L 331 DCNAEVYVVPWEKKIY были выполнены, чтобы определить, ингибируют ли они связывание HK с эндотелиальными клетками. KIC11, NAT26 и LDC27 ингибировали связывание биотина-HK с эндотелиальными клетками с IC 50 , равным 1000, 258 и 60 мкмоль / л соответственно.Минимальная последовательность в LDC27 для ингибирования связывания составляла 13 аминокислот, C 333 NAEVYVVPWEKK 345 (IC 50 = 113 мкмоль / л) .53 Поскольку папаин блокировал связывание HK с эндотелиальными клетками, сайт ингибирования цистеиновой протеазы перекрывается с сайт связывания клетки в домене 3.53 Таким образом, последние 27 аминокислот домена 3, которые примыкают к домену 4, области брадикинина, являются сайтом связывания эндотелиальных клеток. Тромбоспондин (TSP), белок α-гранул тромбоцитов, секретируемый при стимуляции тромбоцитов, также связывается с HK как с участком тяжелой цепи, требующим ионы кальция, так и с легкой цепью, независимо от ионов кальция.54 Взаимодействие TSP с тяжелой цепью кининогенов может происходить в домене 3, перекрывающем последовательность KIC11.54

Последней функцией, приписываемой домену 3, была активность кининогенов по ингибированию α-тромбина.48,50,55 Изолированный домен 3, полученный триптическим расщеплением LK в растворе, ингибировал активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином.50 Область ингибирования тромбина была не то же самое, что область связывания тромбоцитов, потому что одно моноклональное антитело (MoAb), которое не блокирует связывание клеток, нейтрализует способность HK ингибировать активацию тромбоцитов α-тромбином.50 Кроме того, область ингибирования α-тромбина на кининогенах не была одной из трех областей связывания клеток, KIC11, NAT26 или LDC27. 53,56,57 Две другие отдельные последовательности, одна из домена 3, а другая смежная с доменом 3 в домене 4, соответственно, способны ингибировать индуцированную тромбином активацию тромбоцитов с помощью различных механизмов. Kunapuli et al57 экспрессировали домен 3 в Escherichia coli , G235-M357. Рекомбинантный полипептид ингибировал индуцированную тромбином агрегацию тромбоцитов с IC 50 4 мкмоль / л.Следует отметить, что эта последовательность, в отличие от триптического гидролизата LK, не включает какую-либо часть домена 4. Белок, кодируемый экзоном 7, G235-Q292, показал IC 50 13,4 мкмоль / л и рекомбинантный пептид из 23 аминокислот, K270-Q292, показал IC 50 30 мкмоль / л. Наконец, синтетический гептапептид, расположенный в домене 3, L271-A277 (LNAENNA), был минимальной последовательностью для ингибирования агрегации тромбоцитов, индуцированной α-тромбином (IC 50 = 65 мкмоль / л). Как будет описано ниже, эта последовательность конкурирует за связывание тромбина с тромбоцитами, имитируя последовательность GPIb на тромбоцитах за связывание тромбина.

В качестве альтернативы, Hasan et al56 указывают, что ингибирующая активность кининогенов тромбина, ранее приписываемая домену 3,50, полученному протеолитическим расщеплением, на самом деле является доменом 4 или остатком кинина, остающимся присоединенным к С-концу домена 3. В чистом виде или в плазме HK расщепляется калликреином плазмы на искусственной поверхности, брадикинин высвобождается из своего родительского белка тремя способами.58,59 Первое расщепление дает разорванный кининоген, состоящий из двух дисульфидно связанных цепей 64 и 56 кДа.Второе расщепление дает брадикинин (0,9 кДа) и промежуточный свободный от кинина белок с примерно такой же молекулярной массой, что и расщепленный HK. Третье расщепление приводит к стабильному, не содержащему кининов белку, состоящему из двух дисульфидно связанных цепей длиной 64 и 46 кДа. Однако, когда кининогены расщепляются в растворе без поверхности, эта последовательность не обязательно возникает, и брадикинин может оставаться прикрепленным к тяжелой или легкой цепи кининогенов.60 Поскольку изолированный домен 3 был получен протеолитическим расщеплением в растворе, мы исследовали оба расщепленных трипсином LK и домен 3 были получены триптическим расщеплением, и было обнаружено, что фрагмент брадикинина остается прикрепленным к тяжелой цепи LK и изолированному домену 3.32 Затем были проведены исследования, чтобы определить, блокируют ли брадикинин, аналоги брадикинина и продукты его распада, активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином. В экспериментах, которые будут описаны ниже, было показано, что все эти фрагменты домена 4 являются ингибиторами агрегации тромбоцитов, вызванной α-тромбином, предотвращая отщепление α-тромбином своего клонированного рецептора (PAR1) 56.

Конечно, домен 4, область брадикинина, выполняет множество функций, приписываемых этому нанопептиду, в дополнение к его новейшей функции, ингибированию α-тромбина.56 В высвобождении брадикинина HK является лучшим субстратом для калликреина плазмы, а LK — лучшим субстратом для тканевого калликреина. Однако оба кининогена являются субстратами для обеих форм калликреина. Фактор XIIa расщепляет HK аналогично калликреину плазмы.61 Фактор XIa первоначально расщепляет HK на полосы 76 и 46 кДа. При длительном воздействии фактора XIa легкая цепь HK массой 46 кДа протеолизируется на более мелкие, неактивные фрагменты.62 Обработка LK эластазой делает белок лучшим субстратом калликреина плазмы для высвобождения брадикинина и Met-Lys-брадикинина, 63 хотя он разрушает прокоагулянтную активность HK.Катепсин D инактивирует ингибирующую активность цистеиновых протеаз кининогенов.64 Последняя функция домена 4 состоит в том, чтобы служить связывающей областью клетки.65 Карбоксиконцевая часть брадикинина и аминоконцевая часть общей легкой цепи кининогена участвуют в качестве низкоаффинных ( kd = 1 ммоль / л) сайт связывания с эндотелиальными клетками. Важность области связывания клетки с доменом 4 заключается не в ее изолированном сродстве к поверхности клетки, а в ее способности удерживать кининогены в надлежащей конформации для оптимального связывания клеток.26 Например, интактная HK связывается с эндотелиальными клетками, поддерживаемыми при 37 ° C с kd 7 нмоль / л и 1 × 10 7 молекул на клетку по сравнению с кининогеном, не содержащим кининов, который связывается с эндотелиальными клетками, поддерживаемыми при 4 ° C с kd составляет 30 нмоль / л и от 1 до 2,6 × 10 6 молекул / клетку.31 Эти разные данные для взаимодействия интактных или свободных от кининов HK с биологическими поверхностями неудивительны, учитывая значительное изменение формы HK, которое происходит, когда он вырезан на искусственной поверхности26

Легкая цепь

LK имеет размер 4 кДа и состоит из одного домена (D5 L ).Его функция неизвестна. Легкая цепь HK имеет размер 56 кДа и состоит из двух доменов: 5 (D5 H ) и 6. D5 H служит дополнительным сайтом связывания клеток на тромбоцитах, гранулоцитах и ​​эндотелиальных клетках35,49,51,66 Было обнаружено, что две области D5 H участвуют в связывании клеток.67 Одна находится на аминоконцевом конце домена и состоит из последовательностей G 402 KEQGHTRRHDWGHEKQRK 420 (GKE19) и H 421 NLGHGHKHERDQGHGHQRGH 441 (HNL21) (Рис 2).Эти пептиды ингибируют связывание биотин-HK с IC 50 , равным 792 и 215 мкмоль / л соответственно.67 Другая область находится на карбоксиконцевой области D5 H и входит в область двух перекрывающихся пептидов H 479 KHGHGHGKHKNKGKKNGKH 498 (HKh30) и H 471 VLDHGHKHKHGHGHKHKNKGKK 494 (HVL24), которые ингибируют связывание HK с IC 50 , предварительно ответственные за область 0,23, 0,8 мкмоль и 0,8 мкмоль соответственно предполагают, что нейтрофилы на D5 локализованы на h520-h558, аналогично HNL21.68 Независимо от области связывания с клетками, D5 H был признан искусственным поверхностным участком связывания HK.28,69,70 D5 H — богатые гистидином и глицином области обладают способностью связываться с анионными поверхностями, цинком и гепарин.69-72 Используя MoAb, который блокирует свертывание HK и связывание расщепленных HK с анионными поверхностями, 28 пептид массой 7,3 кДа был выделен на иммуноаффинной колонке, который был идентифицирован N-концевым анализом как h541-K497.72. Пептид из 57 аминокислот ингибировал коагулянтную активность и обладал способностью связываться с анионными поверхностями с IC 50 30 мкмоль / л.D5 H содержит два богатых гистидином и глицином участка, один на его карбокси-концевой стороне, который также был богат лизином (h557-K502), аналогично HKh30, а другой — на его аминоконцевой стороне (K420-h558) , аналог HNL21. Используя стратегию делеционного мутагенеза на D5 H , было обнаружено, что область связывания анионной поверхности связана с обеими богатыми гистидин-глицином областями D5 H .70 Любая область была способна поддерживать коагулянтную активность при условии, что она была связана с D6. .70 Этот вопрос был дополнительно исследован с использованием синтетических пептидов.67 Было обнаружено, что пептиды HKh30 и HVL24, которые являются его высокоаффинными клеточными связывающими областями на карбоксиконцевой стороне D5 H , также ингибируют прокоагулянтную активность HK. 67 Никакие другие пептиды из D5 H , включая HNL21, не обладают этим свойством. Кроме того, поликлональные антитела, выращенные к HKh30, способны продлевать прокоагулянтную активность HK в плазме.67 Эти данные указывают на то, что области связывания эндотелиальных клеток и нейтрофильных клеток, а также область связывания искусственной поверхности на HK содержатся в одной и той же высококонсервативной области Д5 Н .Более того, области связывания эндотелиальных клеток и искусственной поверхности перекрываются.67 Пептид HKh30 и его родительский HK обладают дополнительной способностью взаимодействовать с белком М на Streptococcus pyogenes ,73. Интересно, что сайт связывания клеток с самым высоким сродством к D5 H оказывается сайтом связывания искусственной поверхности. Усилия многих исследователей за последние два десятилетия по характеристике связывания HK с искусственными поверхностями указали на расположение сайта связывания клеток HK.Наконец, когда HK не содержит брадикинина, остаточный свободный от кининов кининоген обладает способностью предотвращать адгезионное взаимодействие витронектина с опухолевыми клетками, эндотелиальными клетками, тромбоцитами и моноцитами. 33 Это свойство намного слабее у интактных, непротеолизированных HK. Этот результат был предвосхищен открытием того факта, что после высвобождения брадикинина из HK полученный кининоген, свободный от кининов, гораздо более прочно связывается с анионными поверхностями, чем нерасщепленный HK.74

. Домен 6

HK имеет прекалликреин (S565-K595) и сайт связывания фактора XI (P556-M613) (рис. 2).75-77 Сродство прекалликреина к его сайту связывания на легкой цепи HK составляет около 17 нмоль / л. 78,79 Сайт связывания прекалликреина и фактора XI состоит из последовательности из 31 остатка, которая содержит преимущественно β-поворотные элементы.80 Хотя было показано, что 30-аминокислотная область (S565-K595) является достаточной для связывания, более поздние исследования показывают, что укороченный на N-конце и C-конце 27-мер (W569-K595) имеет важные структурные элементы для связывания прекалликреина. Прокоагулянтная активность 81,82 HK зависит от двух активностей: (1) способности связываться с анионными поверхностями посредством D5 H и (2) способности связывать прекалликреин и фактор XI с доменом 6.28 Ингибирование любого взаимодействия с MoAb, направленного на эти области, будет ингибировать прокоагулянтную активность HK.28,83,84 Домен 6 HK служит акцепторным белком для связывания фактора XI и прекалликреина с тромбоцитами, нейтрофилами и эндотелиальными клетками.37,85,86 Как будет показано ниже, связывание прекалликреина со связанными HK инициирует последовательность событий, которая приводит к активации прекалликреина на биологических поверхностях независимо от активации фактора XII.

Прекалликреин (ПК) продуцируется одним геном, который отображается на хромосоме 4.Структура гена 87 PK аналогична структуре фактора XI. 88 Его мРНК кодирует тяжелую цепь из 371 аминокислоты и легкую цепь из 248 аминокислот, которые удерживаются вместе дисульфидной связью (рис. 3) .88 Аминокислотная последовательность PK имеет 58% гомологию с фактором XI.88 Белок имеет четыре тандемных повтора в аминоконцевой части молекулы из-за связывания первого и шестого, второго и пятого, а также третьего и четвертого полуцистеиновых остатков, присутствующих в каждом повторе ( Рис 3). Такое расположение приводит к четырем группам из 90 или 91 аминокислоты, которые расположены в так называемых яблочных доменах.89,90 Эти же структуры были описаны в факторе XI, что позволяет предположить общее событие генной дупликации предков для прекалликреина плазмы и фактора XI. 87,91

Рис. 3.

Структура прекалликреина. Буквы от A 1 до A 4 представляют яблочные домены тяжелой цепи прекалликреина. Обозначение Фактор XIIa и стрелка у аргинина 371 представляют сайт активации фактора XIIa на прекалликреине.Гистидин 415 , аспарагиновая кислота 464 и серин 559 представляют собой активный каталитический центр калликреина. Круг с заштрихованным фоном представляет области, участвующие в связывании высокомолекулярного кининогена. По материалам Chung et al. 89

Рис. 3.

Структура прекалликреина. Буквы от A 1 до A 4 представляют яблочные домены тяжелой цепи прекалликреина. Обозначение Фактор XIIa и стрелка у аргинина 371 представляют сайт активации фактора XIIa на прекалликреине.Гистидин 415 , аспарагиновая кислота 464 и серин 559 представляют собой активный каталитический центр калликреина. Круг с заштрихованным фоном представляет области, участвующие в связывании высокомолекулярного кининогена. По материалам Chung et al. 89

В плазме PK проявляется в виде дублета 85 и 88 кДа независимо от того, подвергся ли белок восстановлению.92,93 В плазме PK представляет собой быстрый γ-глобулин (изолэлектрическая точка = 8.5-9,0) с циркулирующей концентрацией в крови, оцененной от 35 до 50 мкг / мл (0,41-0,56 мкмоль / л) .94,95 Было показано, что человеческая печень является источником кДНК PK.89 При заболеваниях печени PK плазмы снижается.94 У женщин, принимающих оральные контрацептивы, уровень PK повышен, а у женщин во втором и третьем триместре беременности этого не происходит.14,94 Когда PK активируется в калликреин (α-калликреин) фактором XIIa или фактором XIIf, белок при электрофорезе в геле с восстановленным додецилсульфатом натрия (SDS) имеется две субъединицы: тяжелая цепь приблизительно 52 кДа и два варианта легкой цепи приблизительно 36 и 33 кДа.92,93 Активный центр калликреина содержится в его легкой цепи, потому что эта область включает меченный тритием диизопропилфторфосфат в ковалентной связи с серином 559 .96 Гистидин 415 и аспарагиновая кислота 464 включают две другие аминокислоты, участвующие в каталитическая активность (рис. 3). Длительная инкубация калликреина с самим собой приводит к самоперевариванию его тяжелой цепи в полосы 33 и 20 кД, что видно на электрофорезе в восстановленном SDS-геле с образованием формы, называемой β-калликреином.97 Эти расщепления происходят через тандемные повторы в тяжелой цепи и приводят к белку, который расщепляет HK медленнее и не может активировать нейтрофилы или индуцировать их секрецию эластазы.97,98 Электрофорез в невосстановленном SDS-геле искусственной, отрицательно заряженной поверхностной активации плазмы. приводит к появлению калликреина в комплексе с макроглобулином α 2 2 M) и ингибитором C1, а также к появлению фрагмента прекалликреина / калликреина массой 50 кДа, содержащего часть тяжелой цепи нативного белка.14 По крайней мере 75% PK циркулирует связанными, нековалентно, с HK.99 Области связывания на PK для HK находятся на доменах яблока 1 (F56-G86) и 4 (K266-G295) (рис. 3). 100-104 Прекалликреин области связывания для фактора XII локализованы в доменах яблока 3 и 4, но конкретная последовательность не определена100

Превращение ПК плазмы человека in vitro в калликреин, его активную форму, катализируется активированным фактором XII на поверхности, усиленной HK, или фрагментом фактора Хагемана (βFXIIa) в жидкой фазе.96 В отсутствие фактора XII прекалликреин не активируется на искусственной поверхности. Именно из-за этого открытия эта система называется контактной системой. Одинарная связь (Arg 371 -Ile 372 ) расщепляется, образуя тяжелую цепь из 371 аминокислоты, все еще связанную с легкой цепью одним дисульфидным мостиком без изменения молекулярной массы. На поверхности эндотелиальных клеток это расщепление происходит в отсутствие фактора XII, когда PK связывается с HK.86 Легкая цепь калликреина реагирует с ингибиторами протеаз, в основном α 2 M и ингибитором C1 (C1-INH).C1-INH образует стехиометрический комплекс 1: 1 с калликреином, 105-109, что приводит к потере протеолитической и амидолитической активности. HK защищает калликреин от ингибирования C1-INH и α 2 M в очищенной системе, 109 110, что указывает на механизм субстратной (HK) защиты фермента (калликреина) от активных сайт-направленных ингибиторов протеаз. α 2 M ингибирует кинин-образующую активность, но лишь частично подавляет амидолитическую активность калликреина 108, образуя ковалентный комплекс.Хотя на ингибитор C1 и α 2 M приходится равное количество ингибирования калликреина в плазме, ингибитор C1 в плазме действует быстрее, чем α 2 M.111 Антитромбин III также ингибирует калликреин, но делает это медленно, даже в присутствие гепарина.112 В присутствии HK гепарин, который связывается с HK, 71,72 значительно ускоряет ингибирование калликреина антитромбином. Ингибитор протеина C также признан мощным ингибитором калликреина.113,114. Основными белковыми субстратами калликреина плазмы являются фактор XII, HK и проурокиназа.115 116

Фактор XII продуцируется одним геном, который отображается на хромосоме 5.117,118. Ген фактора XII имеет длину 12 т.п.н. и состоит из 13 интронов и 14 экзонов.119 Как комплементарная ДНК (кДНК), так и последовательность ДНК, фактор XII имеет множественные домены с обширной гомологией последовательностей с областями тканевого активатора плазминогена (tPA; эпидермальный фактор роста [EGF] -подобная область и область крингла) и фибронектина (фиг. 4).119-121 Ген интрона / экзона фактора XII аналогичен по организации семейству сериновых протеаз генов tPA и активатора плазминогена урокиназного типа (uPA), но отличается от большинства других генов белков свертывания крови.119 Его мРНК размером 2,4 т.п.н. одноцепочечный β-глобулин из 596 аминокислот с молекулярной массой от 80 до 90 кДа и изоэлектрической точкой от 6,1 до 6,5 (рис. 4) .122 Его концентрация в плазме оценивается в 30 мкг / мл (0,375 мкмоль / л). ; диапазон от 15 до 47 мкг / мл) .123,124 Было показано, что печень человека является источником фактора XII ДНК 120 , а культивируемые гепатоциты крысы синтезируют фактор XII.125 У людей эстрогены, вводимые женщинам в постменопаузе и беременным женщинам, повышают уровни фактора XII в плазме, и его экспрессия усиливается в изолированной печени крыс, получавших эстроген и пролактин. 126-128 Было показано, что ДНК печени крысы обладает функциональным регулятором эстрогена. Элемент, содержащийся в его 5′-нетранслируемой области, который модулируется 17β-эстрадиолом. 129 Фактор XII, содержащий домен EGF, усиливает пролиферацию клеток HepG2 и включение тимидина и лейцина, предполагая, что он является митогеном для этих клеток.130 Фактически, фактор XII через свой домен EGF функционирует как митоген и стимулирует путь передачи сигнала с помощью митоген-индуцированной протеинкиназы.131 Эта активность не зависит от протеолитической активности активированного фактора XII.

Рис. 4.

Структура фактора XII. Протеолиз по аргининам 334, 343 и 353 (см. Стрелки) приводит к активации фактора XII (β-фактора XIIa). Каталитическая триада фактора XIIa состоит из гистидина 393 , аспарагиновой кислоты 442 и серина 544 .Круг с заштрихованным фоном представляет собой искусственные поверхностные связывающие домены тяжелой цепи фактора XII. Круг с горизонтальными линиями представляет два цинк-связывающих домена фактора XII. По материалам Cool and MacGillivray.119

Рис. 4.

Структура фактора XII. Протеолиз по аргининам 334, 343 и 353 (см. Стрелки) приводит к активации фактора XII (β-фактора XIIa). Каталитическая триада фактора XIIa состоит из гистидина 393 , аспарагиновой кислоты 442 и серина 544 .Круг с заштрихованным фоном представляет собой искусственные поверхностные связывающие домены тяжелой цепи фактора XII. Круг с горизонтальными линиями представляет два цинк-связывающих домена фактора XII. Адаптировано из Cool и MacGillivray.119

Фактор XII можно разделить на две области: тяжелую цепь и легкую цепь. Тяжелая цепь содержит две искусственные поверхностные связывающие области, одну на дистальном аминоконцевом конце (I1-C28), а другую на ее участке фибронектина типа I (T134-R153) (рис. 4).132,133 Недавние исследования с использованием рекомбинантных мутантов с делецией фактора XII подтвердили эти результаты, а также показали, что третья область тяжелой цепи фактора XII, на втором EGF-подобном или крингл-домене (P313-R334, L344-R353), также участвовала в искусственной поверхности. связывание (рис. 4) .134 При контакте с отрицательно заряженными поверхностями FXII автоматически активируется (твердофазная активация) .135 Как связывание с поверхностью, так и расщепление во время аутоактивации приводят к отчетливым, определенным конформационным изменениям.136 Протеиназы плазмы, включая калликреин и плазмин плазмы, активируют фактор XII (FXII) в FXIIa (αFXIIa), разрывая связь, соединяющую Arg 353 -Val 354 , и генерируют двухцепочечную молекулу, состоящую из тяжелой цепи (353 остатка). ) и легкой цепи (243 остатка), удерживаемых вместе дисульфидной связью.120 Легкая цепь FXIIa представляет собой типичную сериновую протеиназу, содержащую канонические Asp 442 , His 393 и Ser 554 и является сайтом для ингибирования его основным плазменным ингибитором, C1-ингибитором.137 Фрагменты фактора Хагемана или фрагменты FXII (FXIIf, βFXIIa) (Mr = 30 кДа) продуцируются путем дальнейшего протеолитического расщепления, в результате чего образуется цепь из 243 остатков, проявляющих каталитическую активность, присоединенную к фрагменту предыдущей тяжелой цепи с помощью одинарной дисульфидной связи. Дефекты легкой цепи фактора XII приводят к нарушению ферментативной активности белка. Фактор свертывания XII в Вашингтоне, округ Колумбия, имеет замену Cys 571 на Ser, что приводит к полной потере прокоагулянтной активности.138 Фактор XII свертывания крови Bern — это белок, который при расщеплении калликреина не может активировать фактор XI или прекалликреин. 139 Контактная активация возникает в результате активации фактора XII. Фактор XII может быть активирован при контакте с отрицательно заряженными поверхностями или добавлением протеазы, которая вызывает ферментативное расщепление. Эти два механизма были названы активацией в твердой и жидкой фазах соответственно.140

Активация фактора XII, возникающая в результате связывания с отрицательно заряженными поверхностями 140–143, называется аутоактивацией.144-149 Некоторые данные свидетельствуют о том, что связывание Zn 2+ с фактором XII вызывает изменение конформации, которое делает белок более восприимчивым к развитию ферментативной активности при связывании с отрицательно заряженными поверхностями. 150-152 Есть четыре сайта связывания цинка, два из которых которые были идентифицированы (h50-h54 и H78-H82) .153 Хотя существует большое количество потенциальных физиологических отрицательно заряженных поверхностей, которые in vitro могут быть связаны с аутоактивацией фактора XII, сама концепция аутоактивации никогда не была достаточно убедительным механизмом для объяснить активацию фактора XII и связанную с ним активацию контактной системы in vivo.Альтернативные механизмы были изучены для активации фактора XII in vivo. Описан активатор фактора XII эндотелиальных клеток кролика, но у человека нет соответствующего примера.154 Наши собственные исследования показывают, что инкубация зимогенного фактора XII с эндотелиальными клетками пупочной вены человека не приводит к активации человеческого фактора XII (неопубликованные данные). . Однако сборка PK, связанного с HK, на эндотелиальных клетках пупочной вены человека приводит к активации PK, независимой от фактора XII, с помощью ассоциированной с клеткой тиолпротеиназы.86 Более того, может происходить активация фактора XII этим путем. В отсутствие прекалликреина фактор XII не активируется на эндотелиальных клетках в очищенной системе или в плазме (неопубликованные данные).

Ферментативная активация фактора XII дает последовательно более мелкие белки, каждый с одним и тем же сериновым сайтом активного сайта. Активация зимогенного фактора XII калликреином плазмы, трипсином или плазмином приводит к уменьшению размера фермента, снижению его свойств связывания с поверхностью и снижению его коагулянтной активности.Существует две основные формы активированного фактора Хагемана: фактор XIIa (αXIIa), белок массой 80 кДа, состоящий из двух дисульфидно-связанных полипептидных цепей, и фактор XIIf (фрагменты фактора Хагемана, HFf, βXIIa) с массой 28-30 кДа. Фрагмент, полученный из фактора XIIa. 155-159 β-Фактор XIIa возникает в результате расщепления по аргининам 334, 343 и 353 120. Форма активированного фактора XII массой 80 кДа обладает способностью связываться с отрицательно заряженными поверхностями133, 134 и активировать фактор XI. Ферментативная форма фактора XII массой 28–30 кДа не имеет свойств связывания с поверхностью, но сохраняет способность активировать прекалликреин и C1.140,160,161

Основным ингибитором протеаз плазмы активированного фактора XIIa и XIIf является ингибитор C1, на который приходится более 90% ингибирования этих протеаз в плазме. 162–165 Ингибитор C1 связывает оба белка и необратимо инактивирует их. Когда он связан с поверхностью каолина, фактор XIIa защищен от инактивации ингибитора C1166. Антитромбин III обладает некоторой ингибирующей активностью в отношении фактора XIIa.167 168 Ингибитор активатора плазминогена-1 (PAI-1) также ингибирует фактор XIIa.169 Эндотелиальные клетки могут также продуцировать белок, который нарушает активацию фактора XII, но не его коагулянтную или амидолитическую активность после образования 170

Основным препятствием для понимания контактной системы является широко распространенное представление о том, что система не имеет биологического значения, потому что она полностью активируется на искусственных поверхностях.Хотя большинство исследований на сегодняшний день описывают активацию этой системы только на искусственных поверхностях, и было выполнено много работы по описанию физиологических, отрицательно заряженных поверхностей (например, кислых фосфолипидов, сульфата холестерина, сульфатидов, кристаллов подагры и т. Д.), Ни одно из них не было убедительным в качестве единый, объединяющий активатор этой системы in vivo. Физиологическая отрицательно заряженная поверхность для активации контактной системы на самом деле представляет собой сборку этих белков на биологических поверхностях, то есть на клеточных мембранах. В защищенной среде клеточных мембран мы теперь показали, что сборка контактных белков на мембранах эндотелиальных клеток приводит к мультибелковому комплексу, который приводит к активации прекалликреина независимо от активированного фактора XII.86 Этот механизм будет рассмотрен в следующем разделе. Подробные исследования белков контактной системы, взаимодействующих с клетками, привели к нынешней гипотезе о том, насколько эта система физиологически активна. Хотя есть некоторые индивидуальные различия между клетками, мы сначала обсудим общие особенности экспрессии контактных белков и взаимодействия с клетками внутрисосудистого компартмента.

Основным белком для сборки контактной системы на клеточных мембранах является HK.Помимо того, что они содержатся в тромбоцитах, гранулоцитах и ​​эндотелиальных клетках, на каждой из этих клеток существуют незанятые сайты связывания для HK. 19-21,36-38, 45,171,172 Почему каждая из этих клеток содержит кининогены, а также имеет незанятые сайты связывания для них, неизвестно. В тромбоцитах менее 8% от общего количества HK тромбоцитов представляет собой HK, прочно связанное с мембраной тромбоцитов.19,45 При активации тромбоцитов секретируется 40% от общего количества HK тромбоцитов, а еще 40% от общего количества экспрессируется на активированной мембране тромбоцитов.45 Общий вклад тромбоцитов в HK плазмы составляет всего 0,23% .19,173 Локальная концентрация HK на активированной мембране тромбоцитов или около нее может в 10 раз превышать концентрацию этого белка в плазме, поскольку тромбоциты выводят свое гранулярное содержимое посредством экзоцитоза.19,45

Большая часть ассоциированных с гранулоцитами HK, по-видимому, является экзогенной HK, прочно связанной и не подлежащей обмену с поверхностью гранулоцитов. 174 Гранулоциты обладают способностью собирать все белки контактной системы.174 Эластаза, высвобождаемая из гранулоцитов, протеолизирует связанный с клетками HK.175 Первоначальные исследования показали, что эндотелиальные клетки пупочной вены человека были способны интернализовать HK.20, 172 Однако более недавние подробные исследования показывают, что не существует механизма интернализации HK эндотелиальными клетками.31 Разница в количестве HK, связанном с мембраной эндотелиальных клеток, когда клетки поддерживаются при 4 ° C по сравнению с 37 ° C, заключается в том, что при более высокой температуре наблюдается повышенная экспрессия сайтов связывания кининогена.20,31,35,172,176

Имеются характерные особенности связывания кининогенов со всеми клетками. Во-первых, связывание кининогена с клетками имеет абсолютную потребность в Zn 2+ .20,21,36,38,171,172. Потребность в Zn 2+ , вероятно, не ограничивается опосредованием связывания HK с клетками его цинк-связывающей областью домена. 5.69,72 Связывание LK с тромбоцитами и эндотелиальными клетками также имеет абсолютную потребность в Zn 2+ .Эти данные показывают, что Zn 2+ необходим для экспрессии сайта связывания кининогена, предполагаемого рецептора.35,48 Хотя некоторые исследователи предположили, что кальций является кофактором связывания с эндотелиальными клетками и тромбоцитами, наши исследования показывают, что это действительно так. не влияет на связывание HK с нестимулированными тромбоцитами, эндотелиальными клетками или гранулоцитами.21,31,36 Однако кальций был необходимым условием для максимальной активации связывания LK или изолированной тяжелой цепи с эндотелиальными клетками после стимуляции сложными эфирами форбола.35 Когда HK или LK связываются с тромбоцитами, гранулоцитами или эндотелиальными клетками, аффинность связывания одинакова (Таблица 1). Поскольку аффинность связывания HK с клетками внутрисосудистого компартмента составляет от 7 до 52 нмоль / л, а концентрация HK в плазме составляет 670 нмоль / л, мы можем постулировать, что все сайты связывания кининогена во внутрисосудистом компартменте являются насыщенными in vivo. Количество сайтов связывания кининогенов на клетках внутрисосудистого компартмента варьируется в зависимости от типа клетки. Тромбоциты имеют примерно 1000 сайтов связывания на клетку; гранулоциты имеют приблизительно 50 000 сайтов на клетку; и эндотелиальные клетки имеют приблизительно 1 000 000 сайтов на клетку при охлаждении до 4 ° C и приблизительно 10 000 000 сайтов на клетку при поддержании при 37 ° C (Таблица 1).20,21,31,35,36,50

Таблица 1. Экспрессия

кининогена на клетках внутрисосудистого компартмента

14355 27 ± 2 I5 125 -LK при 4 ° C
Тип клеток . кД (нмоль / л) * . Количество сайтов .
Тромбоциты
125 I-HK 15 ± 4 911 ± 239
125 I-LK
125 I-D3 39 ± 8 1,227 ± 404
Гранулоциты
125 I-HK 10 ± 1.3 4,8 × 10 4
Эндотелиальные клетки
125 I-HK при 4 ° C 52 ± 13 9,3 × 10 5
43 ± 8 9,7 × 10 5
Биотин-HK при 4 ° C 46 ± 8 2,6 × 10 6
Биотин-HK при 37 ° C 7 ± 3 1.0 × 10 7
14355 27 ± 2 I5 125 -LK при 4 ° C
Тип ячейки . кД (нмоль / л) * . Количество сайтов .
Тромбоциты
125 I-HK 15 ± 4 911 ± 239
125 I-LK
125 I-D3 39 ± 8 1,227 ± 404
Гранулоциты
125 I-HK 10 ± 1.3 4,8 × 10 4
Эндотелиальные клетки
125 I-HK при 4 ° C 52 ± 13 9,3 × 10 5
43 ± 8 9,7 × 10 5
Биотин-HK при 4 ° C 46 ± 8 2,6 × 10 6
Биотин-HK при 37 ° C 7 ± 3 1.0 × 10 7

Экспрессия кининогенов на клеточных мембранах — сложный процесс. Как указано выше в предыдущих разделах, на кининогенах, по-видимому, есть несколько областей, которые позволяют им взаимодействовать с различными клеточными рецепторами. Первой информацией об этом было открытие, что HK связывается с тромбоцитами, эндотелиальными клетками и гранулоцитами посредством участков на их тяжелой и легкой цепях.35,49,51,66 На самом деле HK имеет три домена, которые вписываются в предполагаемый рецептор (ы) кининогена на эндотелиальных клетках.65 Сайты взаимодействия между HK и его предполагаемым рецептором могут находиться в нескольких местах: 3 в домене 3, 1 в домене 4 и 2 в домене 5.53,65,67. Очевидно, что последовательность пептида LDC27 из домена 3 и HKh30 из домена 5 является областями связывания с наивысшим сродством на HK для эндотелиальных клеток.53,67 Важно понимать, что связывание даже низкоаффинная последовательность из домена 4, например, будет блокировать связывание целых HK с эндотелиальными клетками.65 Эта информация предполагает, что HK и, предположительно, LK очень плотно прилегают к своему сайту (-ам) связывания, предполагаемому рецептору (-ам). Фактически, поскольку K i и K d , рассчитанные на основе исследований связывания для HK, LK и всех их субъединиц, одинаковы, две цепи кининогенов не связываются с клетками оптимальным образом. .66,177 Этот вид некооперативного взаимодействия характеризуется потерей энтропии при связывании и предполагает, что весь HK изгибается, чтобы соответствовать своему сайту связывания, предполагаемому рецептору.177 В поддержку этого мнения, когда брадикинин высвобождается из HK, свободные от кининов HK связываются с эндотелиальными клетками с более низким сродством и меньшим количеством сайтов связывания.31,65 Аналогичным образом, когда LK расщепляется между доменами 1 и 2, так что существует При изменении конформации LK происходит снижение связывания LK с эндотелиальными клетками по сравнению с интактным LK.32 Эти изменения в биологии экспрессии HK на клеточных мембранах, когда брадикинин удаляется из белка, ретроспективно предсказуемы из основных конформационных изменения, которые имеют место между HK и кининогеном, не содержащим кининов, как показано в функциональных характеристиках74 в электронной микроскопии26 и документировано с помощью кругового дихроизма.178

Сайт связывания кининогена, предполагаемый рецептор на эндотелиальных клетках, по-видимому, представляет собой структуру, которая может регулироваться. Во-первых, обработка эндотелиальных клеток метаболическими ингибиторами анаэробного и аэробного метаболизма и шунт гексозо-монофосфата отменяют способность HK связываться с клетками.31 Циклогексимид не влияет на связывание HK с эндотелиальными клетками. Во-вторых, температура или последовательность брадикинина в кининогенах влияет на уровень связывания кининогена с эндотелиальными клетками.31,65 В-третьих, обработка эндотелиальных клеток брадикинином приводит к увеличению связывания HK и LK, и этот путь опосредуется протеинкиназой C и рецептором брадикинина B1 эндотелиальных клеток35. В-четвертых, тяжелая цепь и LK имеют потребность в Са 2+ для форбол 12-миристат 13-ацетат 4-0-метиловый эфир активирует их сайт связывания с эндотелиальными клетками, тогда как HK не делает этого. 35 В-пятых, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента усиливают действие брадикинина на позитивную регуляцию сайта связывания HK на эндотелиальных клетках.35 Наконец, когда HK связывается с эндотелиальными клетками, он инициирует серию событий, которые позволяют ферменту, связанному с эндотелиальными клетками или матриксом, активировать прекалликреин, связанный с HK.86 Таким образом, брадикинин активирует связывание кининогена на эндотелиальных клетках, и кининогены могут влиять на брадикинин. формирование.35,86 Эти данные показывают, что эта система жестко контролируется аутокринным образом.

Комбинированные данные, описанные выше, показывают, что должен быть физико-химический рецептор (ы) для кининогенов в крови и эндотелиальных клетках.Недавние данные предполагают, что ряд белков-кандидатов может быть рецептором (ами) кининогена. Исследования ингибирования антител предполагают, что Mac-1 (CD11b / 18) может быть сайтом связывания HK на гранулоцитах.51 Было показано, что фибриноген является неконкурентным ингибитором связывания HK с гранулоцитами и стимулированными АДФ тромбоцитами.175 HK может связываться непосредственно с CD11b. / 18 на гранулоцитах или может взаимодействовать с рецептором, входящим в комплекс с этим интегрином (см. Ниже). Herwald et al180 изолировали на аффинной колонке HK от EA.hy926, линия эндотелиальных клеток пупочной вены человека, 179 — белок массой 33 кДа, который был идентифицирован как gC1qR. gC1qR — это известный белок рецептора C1181, который связывает только HK и пептиды из домена 5, но не LK или связывающие пептиды из домена 3. Кроме того, его способность связывать HK не требует Zn 2+ , хотя другие исследователи утверждают, что Zn 2+ требуется для блоттинга лигандов.182 Более того, только небольшая часть общего gC1qR эндотелиальных клеток обнаруживается на внешней мембране эндотелиальных клеток.183 Эти данные показывают, что gC1qR не может объяснить все характеристики рецептора кининогена. Фактор XII блокирует связывание HK с qC1qR.180 Эти данные подтверждают предыдущее открытие о том, что фактор XII частично блокирует связывание HK с эндотелиальными клетками.184 Только что описанный белок, связывающий кининоген, может составлять часть мультипротеинового рецепторного комплекса для объяснения особенностей связывания HK и LK. в клетки. Недавно были представлены предварительные доказательства того, что HKa также связывается с рецептором урокиназы на эндотелиальных клетках.185 Антитело к домену 2/3 рецептора урокиназы полностью ингибирует связывание HKa с эндотелиальными клетками, как и витронектин, лиганд этого рецепторного домена. Рецептор растворимого урокиназы заметно ингибирует связывание HKa и образует с ним цинк-зависимый комплекс в бесклеточной системе. Обнаружение того, что интегрины тесно связаны с рецептором урокиназы186 и могут усиливать связывание лигандов с доменом 2/3 рецептора урокиназы, может иметь отношение к взаимодействию кининогенов с нейтрофилами, которые отображают как интегрины, так и рецептор урокиназы.Недавние данные показывают, что HKa связывается непосредственно с клетками, трансфицированными Mac-1, и с очищенным Mac-1.186a. Взаимодействие рецептора урокиназы с CD11b / 18 может быть потенциальным путем, по которому связывание кининогена может передавать сигнал внутри клеток. Однако, поскольку тромбоциты не экспрессируют рецептор урокиназы, этот кандидатный сайт связывания также не может быть основным рецептором кининогена на всех клетках. Последние данные показывают, что цитокератин 1 является дополнительным сайтом связывания кининогена (HK и LK) на эндотелиальных клетках, тромбоцитах и ​​гранулоцитах.187 Связывание кининогена с цитокератином 1 требует Zn 2+ , и все клеточные связывающие домены кининогенов взаимодействуют с ним. gC1qR и suPAR блокируют связывание HK с цитокератином, предполагая, что эти белки участвуют в сборке нескольких белков на эндотелиальных клетках. Эти данные вместе с недавним открытием того, что цитокератин 8 является клеточным рецептором плазминогена, предполагают, что цитокератины могут представлять новый класс рецепторов презентации на клетках.188,189 Полная характеристика мультипротеинового рецепторного комплекса кининогена является следующей проблемой в этой области.

На эндотелиальных клетках и тромбоцитах связывание кининогена модулирует активацию контактной системы. Связанный с тромбоцитами и эндотелиальными клетками HK защищен от активации экзогенным плазменным калликреином.66,190 Более того, HK служит сайтом связывания или рецептором для фактора XI и прекалликреина на тромбоцитах и ​​эндотелиальных клетках37,85,86,191 На сегодняшний день нет доказательств, указывающих на то, что Фактор XI, связанный с тромбоцитами, активируется до фактора XIa любым благоприятным образом.192 Однако прекалликреин, связанный с HK на тромбоцитах или эндотелиальных клетках, может приводить к его активации в калликреин с помощью фактора XIIa-зависимого85,193 или независимого86 механизма. Независимый от фактора XII механизм активации прекалликреина обусловлен ассоциированной с мембраной или матриксом тиолпротеазой, активность которой регулируется связыванием HK.86 Обе ситуации приводят к генерации брадикинина.86 Таким образом, сборка контактных белков клеточной мембраны посредством связывания может привести к в комплексе, который может быть активирован с помощью физиологических механизмов, что приводит к высвобождению брадикинина и кинин-зависимой активности.

В дополнение к общим характеристикам контактных белков, взаимодействующих с клетками внутрисосудистого компартмента, как описано выше, существуют также некоторые уникальные межклеточные взаимодействия. Калликреин, но не PK, является хемотактическим для нейтрофилов.194 Воздействие на нейтрофилы концентраций калликреина, способных вызывать хемотаксис, повышенный аэробный гликолиз и активность гексозо-монофосфатного шунта.194 В присутствии кальция нейтрофилы агрегируют в ответ на калликреин.195 Это взаимодействие связано со стимуляцией респираторного выброса нейтрофилов, на что указывает увеличение поглощения кислорода.195 Калликреин также побуждает нейтрофилы высвобождать эластазу нейтрофилов человека из их азурофильных гранулы 196 и нейтрофилы для производства супероксида.197

В плазме нейтрофилы человека выделяют эластазу во время свертывания крови, 198 но нейтрофилы, ресуспендированные в плазме с дефицитом PK или FXII, высвобождают менее одной трети количества эластазы, высвобождаемой в нормальной плазме человека.196 Метод кожного окна, который оценивает хемотаксис лейкоцитов in vivo в ответ на повреждение ткани или микрососудов, показывает значительное нарушение хемотаксиса у пациентов с дефицитом FXII и PK199. Этот результат предполагает, что калликреин и FXIIa важны для высвобождения эластазы. из нейтрофилов в плазме. Кроме того, калликреин индуцирует высвобождение эластазы из нейтрофилов in vitro в зависимости от концентрации, что требует присутствия как активного центра калликреина (на его легкой цепи), так и интактной тяжелой цепи.200 Требование нерасщепленной тяжелой цепи может быть объяснено потребностью в последовательностях как яблока 1, так и яблока 4 для связывания калликреина с HK на нейтрофилах.104,105 Образование калликреина, происходящее при человеческом сепсисе, экспериментальном артрите и энтероколите (см. Ниже), также будет задействовано. нейтрофилы для участия в защите организма. Было также показано, что FXIIa вызывает агрегацию нейтрофилов201 и дегрануляцию (высвобождение эластазы). FXIIf не будет стимулировать нейтрофилы, и, следовательно, требуется домен тяжелой цепи.Однако каталитическая активность FXIIa необходима, поскольку ингибиторы активного центра, D-Pro-Phe-Arg-CH 2 Cl и ингибитор кукурузного трипсина, оба отменяют реакцию.

Фактор XIIa может уменьшать количество рецепторов FcγR1 (Ig) на моноцитах, не влияя на его сродство. Это взаимодействие требует тяжелой цепи, но, в отличие от действия FXIIa на нейтрофилы, не требует каталитического аппарата легкой цепи.202 Сайт на FXII, ответственный за подавление FcγR1, может находиться в пределах N-концевых 18 аминокислот 203, и это уменьшение может нарушать клиренс иммунных комплексов. Toossi et al204 обнаружили, что фактор XII индуцирует синтез моноцитов и секрецию интерлейкина-1 (IL-1) и IL-6. Эти исследователи обнаружили, что секреция этих интерлейкинов, стимулированная липополисахаридами, также усиливается фактором XII.

Первой и наиболее устойчивой функцией кининогенов плазмы является доставка брадикинина, мощного биологически активного пептида.1 Во многих отношениях кининогены и брадикинин, активирующий пептид из домена 4, способствуют проходимости сосудов, усилению кровотока и антитромботической / профибринолитической активности (Таблица 2). Сам по себе брадикинин является мощным стимулятором синтеза простациклина эндотелиальными клетками; ингибитор функции тромбоцитов, 205,206 образования супероксида, 207 и высвобождение тканевого активатора плазминогена; и стимулятор активации плазминогена, 208, 209 образования оксида азота, 210 и образования зависимого от эндотелиальных клеток фактора гиперполяризации гладких мышц.211 Кроме того, брадикинин, благодаря своей способности стимулировать образование NO и цГМФ в эндотелиальных клетках, является основным стимулом для предотвращения субэндотелиальной пролиферации гладких мышц212,213. В присутствии интактного эндотелия кинины, по-видимому, предотвращают рост и пролиферацию гладких мышц сосудов214,215. В качестве альтернативы, когда сосуды повреждены, брадикинин стимулирует протеинкиназу C, а затем и MAP-киназы, что может привести к росту и пролиферации гладких мышц сосудов. ; в отсутствие эндотелия брадикинин стимулирует восстановление сосудов, что может привести к пролиферации гладких мышц и гипертрофии интимы.

Таблица 2. Антитромбиновая, антиадгезивная и профибринолитическая активность кининогенов

5 связывание тромбина с тромбоцитами и эндотелиальными клетками
Домен . Действия .
Брадикинин Стимулирует образование простациклина
Брадикинин Стимулирует образование NO
Брадикинин Стимулирует образование супероксида
G-активатор в тканях Предотвращает расщепление альфа-тромбином его рецептора (PAR1)
Домен 1 Ингибирует предсердный природный фактор
Домен 2 Предотвращает агрегацию тромбоцитов, связанных с кальпаином
35 Домен 3
Домен 5 Предотвращает прилипание клеток к искусственным поверхностям
Домен 5 Вытесняет фибриноген с поверхностей и клеток
Домен 6 Прекалликреин и рецептор фактора XI на эндотелиальных клетках и нейтрофилах
5 связывание тромбина с тромбоцитами и эндотелиальными клетками
Домен . Действия .
Брадикинин Стимулирует образование простациклина
Брадикинин Стимулирует образование NO
Брадикинин Стимулирует образование супероксида
G-активатор в тканях Предотвращает расщепление альфа-тромбином его рецептора (PAR1)
Домен 1 Ингибирует предсердный природный фактор
Домен 2 Предотвращает агрегацию тромбоцитов, связанных с кальпаином
35 Домен 3
Домен 5 Предотвращает прилипание клеток к искусственным поверхностям
Домен 5 Вытесняет фибриноген с поверхностей и клеток
Домен 6 Прекалликреин и рецептор фактора XI на эндотелиальных клетках и нейтрофилах

Брадикинин влияет на свои изменения во внутрисосудистом компартменте, связываясь по крайней мере с двумя рецепторами, рецепторами B1 и B2.218,219 Оба этих рецептора связаны с G; таким образом, связывание брадикинина стимулирует передачу клеточного сигнала. Повышенный брадикинин приводит к усилению клеточной стимуляции. Блокирование рецептора B2 антагонистом Hoe 140 (D-Arg, [Hyp 3 , Thi 5 , D-Tic 7 , Oic 8 ] -брадикинин) у развивающихся крыс приводит к более высокому кровяному давлению, частота сердечных сокращений и вес тела выше контрольных.220 Считается, что модуляция in vivo уровней брадикинина ингибиторами ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) является основой кардиозащитных свойств этих агентов.221 222 Ингибиторы АПФ индуцировали образование NO и простациклина в культивируемых эндотелиальных клетках крупного рогатого скота и защищали изолированное перфузируемое сердце от ишемии. 223 Действие ингибиторов АПФ на повышение уровня NO и защиту изолированного ишемизированного сердца было отменено антагонистом рецептора В2, лечением ингибитором АПФ Hoe 140.224 спонтанно Крысы с гипертонической болезнью предотвращали развитие гипертонии и гипертрофии левого желудочка, а Hoe 140 блокирует эти эффекты.225, 226 Эти данные на животных были распространены на людей, у которых ингибиторы АПФ также, как было показано, защищают от инфаркта миокарда, увеличивая кровоток миокарда и уменьшая ишемические изменения.Хотя эти кардиозащитные эффекты ингибиторов АПФ могут быть достаточно объяснены одним только действием брадикинина на сосудистую сеть, недавняя информация о том, что этот пептид и продукты его распада также являются селективными ингибиторами α-тромбина, также могут внести свой вклад (см. Ниже) 56

.

В дополнение к благотворному действию кининов для поддержания проходимости сосудов было показано, что белки-предшественники брадикинина, кининогены, избирательно ингибируют индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов.Существует по крайней мере три механизма, с помощью которых кининогены влияют на индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов и эндотелиальных клеток 48,50,235 (Таблица 2). Первый механизм является косвенным, вероятно, опосредованным способностью кининогена ингибировать тромбоцитарный кальпаин. Когда α-тромбин активирует тромбоциты, кальпаин тромбоцитов, связанный с цитозольной или внутренней мембраной, перемещается на активированную поверхность тромбоцитов.46,47 Внешний кальпаин тромбоцитов способен протеолизовать гликопротеины поверхностных мембран тромбоцитов, такие как гликопротеин Ib.236 Кальпаин тромбоцитов также протеолизирует предполагаемый рецептор АДФ тромбоцитов, который обнажает рецептор фибриногена тромбоцитов и, таким образом, обеспечивает агрегацию тромбоцитов. 235,237 Таким образом, ингибирование экстернализованного кальпаина тромбоцитов лейпептином или HK, то есть ингибиторами кальпаинов, приводит к ингибированию α-тромбин — опосредованная агрегация тромбоцитов путем предотвращения связывания фибриногена.55,235 Эти данные были использованы для разработки группы соединений, смоделированных на основе домена 2 кининогенов, которые предотвращают агрегацию тромбоцитов, индуцированную α- и γ-тромбином, не мешая другим агонистам тромбоцитов и индуцированным тромбином внутриклеточным тромбоцитам. активация.238 Селективные ингибиторы агрегации тромбоцитов, индуцированной тромбином, могут быть разработаны путем создания пептидов, смоделированных на основе домена 2 кининогенов.

Дополнительные исследования показали, что существует больше механизмов, с помощью которых кининогены ингибируют индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов. Было обнаружено, что HK и LK ингибируют агрегацию и секрецию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином. 48,56 Поскольку секреция тромбоцитов, индуцированная α-тромбином, не зависит от агрегации тромбоцитов и происходит до нее, кининогены должны препятствовать индуцированной α-тромбином активации тромбоцитов другими факторами. механизмы, чем просто ингибирование агрегации тромбоцитов, связанной с кальпаином.Было обнаружено, что 239 HK, LK и D3 неконкурентно ингибируют связывание тромбина, обработанного Phe-Pro-Arg-хлорметилкетоном, с сайтом с высоким сродством тромбоцитов и эндотелиальными клетками 31,48,50,56,240. Открытие было одним из объяснений того, как вся активация тромбоцитов α-тромбином может блокироваться белками с большой молекулярной массой, такими как HK и LK. Дополнительные исследования выявили другие механизмы торможения.

Kunapuli et al57 обнаружили, что рекомбинантный домен 3 (не содержащий остатков домена 4) ингибировал индуцированную тромбином агрегацию тромбоцитов только с вдвое меньшей аффинностью, чем очищенный HK, что указывает на то, что по крайней мере один сайт для ингибирования находится в домене 3 (рис. 5) .Минимальная последовательность ингибирования α-тромбина была Leu 271 -Ala 277 .57 Leu 271 -Ala 277 не подавляла агрегацию тромбоцитов под действием АДФ или коллагена. Он не подавлял амидолитическую или свертывающую активность тромбина. Leu 271 -Ala 277 также не ингибировал изменение формы тромбоцитов и не подавлял агрегацию тромбоцитов SFLLRN. Bradford et al241 получили доказательства того, что Leu 271 -Ala 277 и K270-Q292 ингибируют индуцированную тромбином активацию тромбоцитов при низких концентрациях тромбина, ингибируя связывание тромбина с комплексом GPIb-IX-V.Кроме того, антитела к GPIbα и лиганды ингибировали связывание HK с тромбоцитами, а HK ингибировали связывание антител к GPIbα с тромбоцитами. Более того, пептиды домена 3 напрямую ингибировали высокоаффинное связывание I-α-тромбина с тромбоцитами. Наконец, HK ингибировал связывание тромбина с фибробластами, трансфицированными GPIb-IX-V. Эти данные свидетельствуют о том, что пептиды домена 3 могут блокировать связывание α-тромбина с его высокоаффинным сайтом на GPIbα. Последовательность NAEN появляется в HK, пептидах домена 3 и лиганд-связывающем домене GPIbα.Возможно, что домен 3 HK может имитировать этот высокоаффинный сайт связывания тромбина. Эти данные не обязательно означают, что связывание тромбина с GPIbα само по себе приводит к активации тромбоцитов. Скорее, GPIbα может служить для презентации тромбина клонированному рецептору тромбина, связанному с G-белком, тем самым снижая концентрацию тромбина, необходимую для расщепления последнего рецептора. Кининогены, блокируя это взаимодействие, будут затем модулировать активацию тромбоцитов, индуцированную тромбином.

Рис.5.

Домены ингибирования тромбина кининогенов. Кружок на сплошном фоне обозначает ингибирующую активность тромбина. Круг с заштрихованным фоном представляет область связывания клеточной мембраны. Круг с диагональными линиями представляет перекрывающуюся активность ингибирования папаина и активность связывания с клеточной мембраной.

Рис. 5.

Домены ингибирования тромбина кининогенов. Кружок на сплошном фоне обозначает ингибирующую активность тромбина. Круг с заштрихованным фоном представляет область связывания клеточной мембраны.Круг с диагональными линиями представляет перекрывающуюся активность ингибирования папаина и активность связывания с клеточной мембраной.

Третий механизм ингибирования α-тромбина был описан Hasan et al.56 Кининогены и производные от него пептиды фактически ингибируют индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов, блокируя способность фермента расщеплять клонированный рецептор тромбина (PAR1) .56 В уже описанной выше работе очищенный домен 3, полученный в результате протеолитического расщепления, действительно имел присоединенный к нему домен 4.32,56 Было обнаружено, что пептиды из домена 4, BK и родственных последовательностей ингибируют активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином (рис. 5). Хотя HK, LK и D3 с большой молекулярной массой ингибировали связывание α-тромбина с тромбоцитами, изолированный домен 4, то есть брадикинин (RPPGFSPFR) и MKRPPGFSPFRSSRIG, не ингибировал связывание.48,50,56 Эти данные показали, что действует другой механизм. эти пептиды блокируют активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином. Подобно исходным белкам HK и LK, пептиды домена 4 не подавляли способность α-тромбина расщеплять трипептидный субстрат или фибриноген сгустка, что позволяет предположить, что эти пептиды не взаимодействуют с активным сайтом α-тромбина или экзосайтом связывания аниона.31,48,50,56 Более того, как HK и LK, эти пептиды не были субстратами α-тромбина и не образовывали комплексов с α-тромбином.31,48,56 Пептиды домена 4 не блокировали АДФ-, коллаген- , или U46619-индуцированная агрегация тромбоцитов in vitro.56 Они действительно блокировали индуцированную α-тромбином мобилизацию кальция и индуцированную γ-тромбином агрегацию тромбоцитов в плазме in vitro.56 Минимальная форма домена 4, которая ингибирует индуцированную α-тромбином активацию тромбоцитов был пептид RPPGF (рис. 5) .56 RPPGF является основным продуктом распада ангиотензинпревращающего фермента брадикинина в плазме со скоростью метаболической деградации 4.2 часа. 242 243 Механизм, с помощью которого RPPGF и родственные пептиды домена 4 ингибируют активацию тромбоцитов, индуцированную α-тромбином, уникален. RPPGF не блокирует пептид рецептора тромбина, SFLLRN, от индукции активации тромбоцитов. 56 Пептиды домена 4 предотвращают расщепление α-тромбином клонированного рецептора тромбина, чтобы инициировать процесс активации. Этот результат означает, что пептиды домена 4 фактически препятствовали α-тромбину от расщепления клонированного рецептора тромбина после аргинина 41 , что является критическим шагом в активации α-тромбина клеток через этот рецептор.56 Когда был получен пептид, охватывающий сайт расщепления α-тромбином на клонированном рецепторе тромбина (NATLDPRSFLLR), RPPGF и HK фактически препятствовали α-тромбину расщеплять этот пептид между аргинином и серином. 56 RPPGF специфически влиял на способность тромбина к расщепляют клонированный рецептор тромбина для активации тромбоцитов, не влияя на его прокоагулянтную активность. Эти объединенные данные показывают, что пептиды домена 4 и та же последовательность в кининогенах являются селективными протеолитическими ингибиторами активации тромбоцитов, индуцированной α-тромбином, поскольку они направляются на субстрат α-тромбина, клонированный рецептор тромбина.Соединения на основе последовательности RPPGF могут представлять новый класс ингибиторов тромбина, которые достигают селективности, будучи направленными на субстраты тромбина, а не на сам фермент.

Помимо этих уникальных механизмов ингибирования α-тромбина, контактные белки участвуют в клеточном фибринолизе. Со времени распознавания дефицита HK этому белку приписывают роль в фибринолитическом процессе, хотя конкретный физиологический механизм не был известен.2,4 Уже более 35 лет известно, что контактная активация может увеличивать общий фибринолиз плазмы. 244 Калликреин, фактор XIIa и фактор XIa расщепляют плазминоген напрямую, хотя и гораздо менее эффективно, чем tPA или uPA. 245-248 Однако брадикинин имеет был охарактеризован как мощный и селективный in vivo индуктор высвобождения тканевого активатора плазминогена из эндотелиальных клеток кроликов и людей.208,209 Плазменный калликреин также был охарактеризован как кинетически благоприятный активатор одноцепочечной урокиназы in vitro.116 Более поздние исследования показали, что активация одноцепочечной урокиназы калликреином может лучше всего происходить на поверхности тромбоцитов и эндотелиальных клеток.85,193,249

Эти исследования побудили нас изучить взаимосвязь сборки прекалликреина на эндотелиальных клетках и то, как он может участвовать в активации одноцепочечной урокиназы (Таблица 2) .86 Когда прекалликреин связывается с HK на эндотелиальных клетках, зимоген активируется до калликреина, как указано. за счет развития амидолитической активности, изменения структуры прекалликреина на калликреин при гель-электрофорезе и расщепления HK.86 Активация прекалликреина происходит независимо от любых активированных форм фактора XII. Активирующий прекалликреин фермент (ы) не является сериновой протеазой, а ассоциированной с мембраной или матрикс-ассоциированной тиолпротеазой.86 Активация прекалликреина эндотелиальными клетками кинетически подобна активации прекалликреина фактором XII на искусственной поверхности. Эти данные впервые показывают, что контактная сборка белка на эндотелиальных клетках приводит к активации прекалликреина в отсутствие фактора XII и искусственной поверхности.86 Эта сборка контактных белков позволяет активировать физиологический путь этой системы. Степень активации прекалликреина регулируется HK. Повышение концентрации HK активирует фермент, который активирует связанный с клетками прекалликреин. Таким образом, HK регулирует активацию прекалликреина, которая, в свою очередь, высвобождает больше брадикинина из связанных с клетками HK и удаляет HK с поверхности, чтобы замедлить активацию прекалликреина.86 В подтверждение этого механизма мы недавно показали, что пептиды, полученные из D6 HK, могут подавляют образование плазмина, препятствуя связыванию прекалликреина с HK на поверхности эндотелиальных клеток.250 Кроме того, повышенный уровень брадикинина увеличивает связывание кининогена, что снижает расщепление растворимого калликреина на HK для высвобождения большего количества брадикинина. 35 Таким образом, существует строго регулируемый путь активации прекалликреина и высвобождения брадикинина.

Путь активации прекалликреина на эндотелиальных клетках участвует в двух путях фибринолиза. Во-первых, калликреин расщепляет HK с высвобождением брадикинина, который является наиболее мощным и специфическим стимулятором высвобождения активатора плазминогена тканевого типа эндотелиальных клеток.208,209 Во-вторых, калликреин индуцирует кинетически благоприятное превращение одноцепочечной урокиназы в двухцепочечную урокиназу в среде, в которой существует конститутивная молярная избыточная секреция ингибитора активатора плазминогена эндотелиальных клеток-1,86,250. Образование двухцепочечной урокиназы приводит к 4,3- кратное увеличение активации плазминогена. Эта система активации плазминогена происходит в среде, в которой отсутствует фактор XIIa. Этот механизм активации одноцепочечной урокиназы представляет собой путь клеточного фибринолиза, который либо не зависит от активации одноцепочечной урокиназы, либо связан с ней, связанной с ее связыванием с рецептором.251 Возможное связывание HK (и, следовательно, калликреина) с доменом 2/3 рецептора урокиназы 185 на той же молекуле, что и проурокиназа, которая связывается с доменом 1 рецептора, может способствовать очень эффективному расщеплению последнего калликреином. . Кроме того, HK может конкурировать с витронектином, который также связывается с доменом 2/3 рецептора урокиназы, и замещать витронектин и связанную с ним молекулу, ингибитор-1 активатора плазминогена, тем самым усиливая фибринолиз.

Активация контактной системы считается одним из медиаторов синдрома системного воспалительного ответа (SIRS).267 Контактная активация фактора XII и прекалликреина при сепсисе приводит к расщеплениям, которые активируют их ферменты, которые быстро реагируют с C1-ингибитором с образованием комплексов фактора XIIa-C1-INH и калликреин-C1-INH (Таблица 3) .268 Результатом является истощение функционального прекалликреина и фактора XII с сохранением нормальных уровней соответствующих антигенов. Функциональный C1-ингибитор также снижается, но его антиген остается постоянным или может даже увеличиваться, что позволяет предположить, что он ведет себя как слабый реагент острой фазы.По мере снижения функционального C1-INH α 2 M становится более важным ингибитором калликреина и формируются комплексы α 2 M-Kal.14 Коагулянтная активность HK и антиген снижаются параллельно.269 Как это ни парадоксально, по неизвестным причинам функциональный фактор XI может увеличиваться 269

Исследования пациентов с грамотрицательным сепсисом показали, что функциональный фактор XII, прекалликреин и C1-INH снижены у пациентов с гипотензивной септицемией.270 У пациентов с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС) из-за сепсиса или виремии снизился функциональный фактор XII, прекалликреин и C1-INH, но у лиц с ДВС-синдромом, вторичным по отношению к неоплазии, не было значительных изменений в системе калликреин-кинин.270 У пациентов с послеоперационным периодом. сепсис, снижение активности прекалликреина и повышение брадикинина были связаны с положительными посевами крови и гипотонией.271 При экспериментальном инфицировании людей брюшным тифом у всех пациентов с брюшным тифом было отмечено снижение функционального прекалликреина и C1-INH, но соответствующие антигены остались неизменными. .272 При респираторном дистресс-синдроме у взрослых (ARDS) у затронутых пациентов были снижены уровни фактора XII и прекалликреина в плазме. 269 273 HK и активность C1-INH также снизились, но были повышены уровни антигена C1-INH. Снижение уровня прекалликреина также было зарегистрировано у пациентов с сепсисом, вызванным вирусами, грибками или риккетсиями. У пациентов с пятнистой лихорадкой Скалистых гор снизились уровни прекалликреина, но увеличились комплексы калликреин-C1-ингибитор.274 Поскольку комплексы калликреин-C1-ингибитор быстро выводятся в большинстве случаев септического шока, 275 мы разработали сэндвич-ферментный иммуноферментный анализ для α 2 M-Kal комплексов и обнаружили, что при септической гипотензии, но не только при сепсисе, уровни α 2 M-Kal комплексов были повышены.276

Ни одно из упомянутых выше исследований не показало, является ли активация контактной системы ранним событием или связано с осложнениями сепсиса, такими как гипотензия и полиорганная недостаточность. Чтобы ответить на этот вопрос, нормальные люди-добровольцы получили низкую дозу эндотоксина E coli (0,4 нг / кг массы тела). У этих людей развилось гриппоподобное заболевание, связанное с гипердинамическим сердечно-сосудистым состоянием, которое длилось 24 часа.277 Функциональные уровни прекалликреина были значительно ниже в группе эндотоксина по сравнению с контролем через 2 часа после инфузии и оставались низкими на протяжении остальной части экспериментального протокола через 5 и 24 часа. Концентрация комплексов α 2 M-Kal была значительно увеличена в четыре раза в группе, получавшей эндотоксин, на 3 часа и в пять раз на 5 часов, со снижением до нормального уровня циркулирующих комплексов на 24 часа. Таким образом, низкая доза эндотоксина может вызвать длительное состояние контактной активации.

Чтобы доказать, что контактная активация связана либо с шоком, либо с ДВС-синдромом, были проведены исследования на животных (таблица 4). В установленной экспериментальной модели бактериемии у бабуинов две концентрации E coli были использованы для получения летальной и несмертельной гипотензии. В летальной группе развилась необратимая гипотензия, которая значительно коррелировала как со снижением функциональных уровней HK, так и с увеличением комплексов α 2 M-Kal.278 В нелетальной группе наблюдалась обратимая гипотензия, менее заметное снижение HK и лишь небольшое повышение α. 2 M-Kal. 278 Необратимая гипотензия коррелировала с активацией контактной системы. Дальнейшие исследования были проведены для выяснения причин контактной активации при шоке и гипотонии. MoAb к человеческому фактору XII, который способен in vitro ингибировать коагулянтную активность фактора XII в плазме павиана на 60% и замедлять расщепление кининогена в плазме павиана, активированной декстрансульфатом, вводили смертельной группе павианов за 30 минут до E coli .279 Хотя снижение уровня фактора V, фибриногена и тромбоцитов было одинаковым в обеих группах, а значения прекалликреина были нормальными, в группе без лечения наблюдалось заметное снижение HK, достигающее 40% от исходного уровня к 300 минутам. В группе, получавшей MoAb к фактору XII, HK оставался стабильным и был значительно выше (110% от исходного уровня) через 360 минут. Кроме того, в необработанной группе наблюдалось прогрессивное увеличение комплексов M-Kal α 2 , которое было очень значительным и полностью блокировалось MoAb в обработанной группе.Значительное снижение среднего системного артериального давления наблюдалось в обеих группах животных между 60 и 120 минутами. График Каплана-Мейера показал, что обработанные животные выживали значительно дольше, чем необработанные животные. Подавление активации контактной системы с MoAb к фактору XII модулировало гипотензию.279

Таблица 4.

Экспериментальные заболевания Состояния, для которых активация контактной системы является патогенетической

D —
Болезнь 4-150 . ПК . HK . C1 INH . XI (Закон) . XII (Акт.) . Комплексы α2M-Kal (Ант.) . Комплексы C1 INH-Kal (Ант.) .
. Закон. . Ант. . Закон. . Ант. . Закон. . Ант. . . . . .
Сепсис павиана 278,279 D D I I I D D
Энтероколит крысы 286,287 D D D
D —
Болезнь 4-150 . ПК . HK . C1 INH . XI (Закон) . XII (Акт.) . Комплексы α2M-Kal (Ант.) . Комплексы C1 INH-Kal (Ант.) .
. Закон. . Ант. . Закон. . Ант. . Закон. . Ант. . . . . .
Сепсис павиана 278,279 D D I I I D D
Энтероколит крыс 286,287 D D

Кристаллизация нашего взгляда на контактную систему | Кровь

Как система контактной активации (CAS) собирается на ячеистых поверхностях? Хотя исследователи изучали контактные факторы прекалликреин (PK), высокомолекулярный кининоген (HK) и фактор XII (FXII) и их соответствующие роли в воспалении, иммунитете и коагуляции более полувека, теперь мы получаем некоторая ясность в отношении четвертичной структуры этого увлекательного мультиферментного комплекса.В этом выпуске Blood Кайра и его коллеги описывают первую кристаллическую структуру домена FXII в комплексе с предполагаемым рецептором, и они предлагают модель, с помощью которой этот связывающий белок, рецептор глобального комплемента C1q (gC1qR), может действовать как шаперон для объединения контактных факторов в группу до инициации фактора XI (FXI) -зависимого свертывания крови и высвобождения воспалительного брадикинина (BK). 1

Интерес к CAS значительно расширился в последние годы, поскольку в настоящее время изучаются контактные факторы в качестве терапевтических мишеней для тромботических и воспалительных состояний.Действительно, было показано, что ингибиторы PK, HK и FXII ограничивают экспериментальный тромбоз без увеличения кровотечения на животных моделях, 2 , тогда как ранние исследования на людях показали, что нацеливание на FXI является антитромботическим без признаков значительного гемостатического действия. компромисс. 3 FXII мутации увеличения функции также были описаны, которые вызывают редкое воспалительное заболевание наследственный ангионевротический отек с нормальным ингибитором C1. 4 Несомненно, множество биологических активностей, связанных с CAS, предоставляют возможности для новых подходов к уменьшению тромбоза и воспаления при различных болезненных состояниях.

Учитывая его многочисленные функции в растущем списке заболеваний, gC1qR также стал потенциальной мишенью для терапевтических разработок. gC1qR — это повсеместно экспрессируемый высокоанионный многофункциональный белок, который играет важную роль в инфекциях, воспалениях, а также в прогрессировании и метастазировании рака. 5,6 gC1qR, как было показано, связывает множество белков на поверхности клетки, в плазме и на патогенных микробах, тогда как белки плазмы, которые связываются с gC1qR, в первую очередь относятся к белкам CAS, а также к фибриногену, тромбину, и мультимерный витронектин. 7,8 Это предполагает, что gC1qR может участвовать в образовании фибрина, особенно в местах иммунного повреждения и / или воспаления. Тем не менее, для того, чтобы более подробно разграничить конкретные последующие виды деятельности, мы должны лучше понять взаимосвязь структура-функция, которая позволяет рационально проектировать аллостерические модуляторы.

Выводы Kaira et al. Обеспечивают основу для потенциального пути вперед, а также предлагают понимание того, как CAS может взаимодействовать с другими рецепторами и поверхностными инициаторами, способствуя свертыванию и воспалению (см. Рисунок).Используя кристаллографию, поверхностный плазмонный резонанс и плазменный анализ коагуляции, авторы определили специфические остатки и кофакторы, которые необходимы для сборки комплекса HK / FXII / gC1qR, а также показали, что gC1qR способствует FXII-зависимой коагуляции. Эксперименты по гель-фильтрации впервые показывают, что одновременное связывание HK и FXII происходит как часть этой сборки с gC1qR, объединяющей FXII и HK в тройной комплекс более высокого порядка. Исследования мутагенеза также идентифицируют критический компонент тримера gC1qR, который предполагает стерическую окклюзию как механизм асимметричного связывания HK.

Воздействие на кровь различных отрицательно заряженных веществ или искусственных поверхностей вызывает протеолитическую активацию CAS, которая приводит к образованию тромбина, образованию фибрина и высвобождению воспалительных BK. Обычно события коагуляции изображаются как последовательный каскад ферментативных стадий и путей. Представленное здесь исследование показывает, что четвертичные стриктуры более высокого порядка мультиферментных комплексов, вероятно, играют центральную роль в повышении каталитической эффективности многих взаимодействий факторов свертывания крови.Действительно, поскольку FXI является гомологом PK, который также циркулирует в комплексе с HK, 9 и FXI, как было показано, реципрокно активируют FXII, 10 предложенная модель может напрямую связывать инициированную CAS активацию FXI и последующую коагуляцию. Хотя эта статья завершает давнюю дискуссию о том, как собираются контактные факторы по отношению к gC1qR, необходимы дополнительные исследования для изучения относительной важности других предполагаемых рецепторов / кофакторов, таких как рецептор урокиназы или цитокератин 1, в модуляции CAS.

Раскрытие информации о конфликте интересов: E.I.T. является сотрудником и акционером Aronora, Inc. E.I.T. и Орегонский университет здоровья и науки (OHSU) имеют значительную финансовую заинтересованность в Aronora, Inc., компании, которая разрабатывает ингибиторы FXI и контактных систем. Этот потенциальный конфликт интересов был рассмотрен и разрешен Комитетом по конфликту интересов в исследованиях OHSU.

Система контакта с плазмой, каскад протеаз на стыке воспаления, коагуляции и иммунитета

https: // doi.org / 10.1016 / j.bbamcr.2017.07.009Получить права и контент

Основные моменты

Контактная система представляет собой каскад прокоагулянтов и провоспалительных протеаз плазмы, управляемый активированным фактором XII (FXIIa)

32

Сериновая протеаза FXIIa запускает калликреиновую кининовую систему, которая генерирует воспалительный медиатор брадикинин

Избыточное производство брадикинина из-за нарушения регуляции FXIIa лежит в основе наследственного отека Наследственный ангионевротический отек

FX через внутренний путь коагуляции, но не играет роли в гемостазе

Нацеливание на FXIIa обеспечивает тромбозащиту без нарушения гемостаза с дополнительными противовоспалительными действиями

Abstract

Контактная система является мощным провоспалительным и провоспалительным средством плазмы se каскад, который инициируется связыванием («контактом») — индуцированной автоактивацией зимогена фактора XII.Образовавшаяся активная сериновая протеаза FXIIa затем расщепляет прекалликреин плазмы до калликреина, который, в свою очередь, высвобождает медиатор брадикинин из его предшественника высокомолекулярного кининогена. Брадикинин вызывает воспаление с последствиями для защиты хозяина и врожденного иммунитета. FXIIa также запускает внутренний путь коагуляции, который, как было показано, в решающей степени способствует тромбозу. Наоборот, , дефицит FXII ухудшает тромбоз в моделях на животных, не вызывая аномального чрезмерного кровотечения.Недавняя работа показала, что контактная система, управляемая FXIIa, является многообещающей мишенью для антикоагулянтов и противовоспалительных препаратов. Этот обзор посвящен биохимии контактной системы, ее регуляции эндогенными и экзогенными ингибиторами и роли в болезненных состояниях. Эта статья является частью специального выпуска, озаглавленного «Протеолиз как регуляторное событие в патофизиологии» под редакцией Стефана Роуз-Джона.

Ключевые слова

Протеазы

Протеазы плазмы

Коагуляция

Тромбоз

Фактор XII

Ангионевротический отек

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

© 2017 Elsevier B.V.

Рекомендуемые статьи

Цитирование статей

Контактная система на перекрестке различных ключевых патофизиологических функций: обновленное понимание, лабораторные исследования и перспективы на будущее

Контактная система инициирует внутренний путь коагуляции и запускается путем активации фактора XII, который затем активирует прекалликреин до калликреина и фактор XI до фактора XIa, и в присутствии высокомолекулярного кининогена образует «петлю активации фазы контакта», которая усиливает активацию фактора XII.Дефицит FXII не связан со склонностью к кровотечениям, но когда кровь сгущается, тромб становится менее плотным, что способствует антитромботической защите. Ингибирование активированного фактора XII становится эффективной мишенью для предотвращения тромбоэмболических заболеваний, не вызывая геморрагического риска. Активированный фактор XII проявляет другие активности, в том числе он может активировать комплемент и провоцировать воспаление, способствуя врожденному иммунитету. Он также стимулирует фибринолиз за счет активации uPA от scu-PA.Среди других компонентов контактной фазы фактор XI играет более важную роль в путях коагуляции и может напрямую активировать FX, FVIII и FV в независимом от FIX пути. Его дефицит связан с легким кровоточащим диатезом («псевдогемофилия» или гемофилия С), с разной частотой встречаемости среди родственников. Недавно было продемонстрировано, что возникновение тромботических событий в тот же день после инфузии концентратов иммуноглобулинов вызвано присутствием следовых количеств активированного фактора XI, что указывает на ключевую роль этого фактора в тромбогенности.Прекалликреин может активироваться на поверхности эндотелия в присутствии высокомолекулярного кининогена, при расщеплении которого образуются брадикинины и способствует тонусу сосудов и воспалению. Контактная фаза через ее петлю активации становится важной физиологической системой, которая может инициировать и регулировать различные биологические функции и находится на перекрестке различных биологических активностей. Многие физиологические функции организма тесно связаны между собой, что делает глобальный подход особенно полезным для понимания взаимодействий, которые могут возникнуть в результате любого отклонения от нормы одного из них.Новые фармацевтические препараты, нацеленные на определенную активность, необходимо исследовать на предмет всех возможных помех или побочных эффектов. В этой статье мы стремимся представить и обобщить нынешнее понимание активации и регуляции системы контактной фазы, ее участия в различных физиологических функциях и лабораторных инструментов для ее исследования.

Пенициллин вызывает неаллергическую анафилаксию, активируя контактную систему.

  • 1.

    Simons, F. E. et al. Международный консенсус по (ICON) анафилаксии. World Allergy Organ. J. 7 , 1–19 (2014).

    Google ученый

  • 2.

    Накамура Т. и Мурата Т. Регулирование проницаемости сосудов при анафилаксии. руб. J. Pharmacol. 175 , 2538–2542 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 3.

    Лью, У. К., Уильямсон, Э. и Танг, М. Л. Анафилаксия со смертельным исходом и госпитализация в Австралии. J. Allergy Clin. Иммунол. 123 , 434–442 (2009).

    PubMed Google ученый

  • 4.

    Гонсалес-Перес, А., Апонте, З., Видаурре, К. Ф. и Родригес, Л. А. Эпидемиология анафилаксии у пациентов с астмой и пациентов без нее: обзор базы данных Соединенного Королевства. J. Allergy Clin. Иммунол. 125 , 1098–1104 (2010).

    PubMed Google ученый

  • 5.

    Wood, R.A. et al. Анафилаксия в Америке: распространенность и характеристики анафилаксии в Соединенных Штатах. J. Allergy Clin. Иммунол. 133 , 461–467 (2014).

    PubMed Google ученый

  • 6.

    Moreno, E. et al. Использование β-лактамных антибиотиков у пациентов с аллергией на β-лактам в анамнезе: современные концепции. Pol. Arch. Междунар. Med. 127 , 540–549 (2017).

    PubMed Google ученый

  • 7.

    Романо А. и Каубет Дж. С. Аллергия на антибиотики у детей и взрослых: от клинических симптомов до диагностики кожных проб. J. Allergy Clin. Иммунол. Практик. 2 , 3–12 (2014).

    PubMed Google ученый

  • 8.

    Renaudin, J. M., Beaudouin, E., Ponvert, C., Demoly, P. & Moneret-Vautrin, D.A. Тяжелая лекарственная анафилаксия: анализ 333 случаев, зарегистрированных Сетью аллергической бдительности с 2002 по 2010 год. Аллергия 68 , 929–937 (2013).

    CAS PubMed Google ученый

  • 9.

    Neugut, A. I., Ghatak, A. T. & Miller, R. L. Анафилаксия в Соединенных Штатах: исследование эпидемиологии. Arch. Междунар. Med. 161 , 15–21 (2001).

    CAS PubMed Google ученый

  • 10.

    Паттерсон, Р. А. и Станкевич, Х. А. Пенициллин, аллергия (StatPearls Publishing, LLC, Treasure Island, 2018).

    Google ученый

  • 11.

    Идсо, О., Гуте, Т., Уиллкокс, Р.Р. и Век, А.Л. де. Характер и степень побочных реакций на пенициллин, особенно со смертельным исходом от анафилактического шока. Бык. Всемирный орган здравоохранения. 38 , 159–188 (1968).

  • 12.

    Trubiano, J.А., Адкинсон, Н. Ф. и Филлипс, Е. Дж. Аллергия на пенициллин не обязательно навсегда. JAMA 318 , 82–83 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 13.

    Hjortlund, J., Mortz, C.G., Skov, P. S. и Bindslev-Jensen, C. Повторный осмотр диагноза аллергии на пенициллин: значение истории болезни, кожных тестов, специфических IgE и длительной стимуляции. Аллергия 68 , 1057–1064 (2013).

    CAS PubMed Google ученый

  • 14.

    Мэйси Э. Аллергия на пенициллин: Оптимизация диагностических протоколов, значение для общественного здравоохранения и потребности будущих исследований. Curr. Opin. Allergy Clin. Иммунол. 15 , 308–313 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 15.

    Arroliga, M. E. et al. Пилотное исследование кожных проб на пенициллин у пациентов с аллергией на пенициллин в анамнезе, поступивших в отделение интенсивной терапии. Сундук 118 , 1106–1108 (2000).

    CAS PubMed Google ученый

  • 16.

    Macy, E. & Ngor, E. W. Безопасная диагностика клинически значимой аллергии на пенициллин с использованием только пенициллоил-полилизина, пенициллина и перорального амоксициллина. J. Allergy Clin. Иммунол. Практик. 1 , 258–263 (2013).

    PubMed Google ученый

  • 17.

    Gadde, J., Spence, M., Wheeler, B. & Adkinson, N. F. Jr. Клинический опыт проведения кожных тестов на пенициллин в крупной городской клинике ЗППП. JAMA 270 , 2456–2463 (1993).

    CAS PubMed Google ученый

  • 18.

    Шмайер А. Х. Контактная активация и системы калликреин / кинин: патофизиологические и физиологические активности. J. Thromb. Гемост. 14 , 28–39 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 19.

    Oschatz, C. et al. Тучные клетки увеличивают проницаемость сосудов за счет инициируемого гепарином образования брадикинина in vivo. Иммунитет 34 , 258–268 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • 20.

    Sala-Cunill, A. et al. Активация системы контакта с плазмой вызывает анафилаксию при тяжелых аллергических реакциях, опосредованных тучными клетками. J. Allergy Clin. Иммунол. 135 , 1031–1043 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 21.

    Бендер, Л., Вайдманн, Х., Роуз-Джон, С., Ренне, Т. и Лонг, А. Т. Воспалительные реакции, вызванные фактором XII, с последствиями для анафилаксии. Фронт. Иммунол. 8 , 1115 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 22.

    Наудин, К., Бурилло, Э., Бланкенберг, С., Батлер, Л., Ренне, Т. Активация контакта фактора XII. Семин. Тромб. Хемост. 43 , 814–826 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 23.

    Gao, Y. et al. Формула из трех трав Шуанг-Хуан-Лянь стабилизирует тучные клетки за счет активации митохондриального унипортера кальция. Sci. Отчет 7 , 38736 (2017).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 24.

    Стрейт, Р. Т., Моррис, С. С., Янг, М., Ку, X. и Финкельман, Ф. Д. Пути анафилаксии у мышей. J. Allergy Clin. Иммунол. 109 , 658–668 (2002).

    CAS PubMed Google ученый

  • 25.

    Khodoun, M. et al. Арахис может способствовать анафилактическому шоку, активируя комплемент. J. Allergy Clin. Иммунол. 123 , 342–351 (2009).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 26.

    Yang, W. et al. β 2 -Адренорецепторная блокада ухудшает системную анафилаксию за счет увеличения гиперпроницаемости у анестезированных мышей. Allergy Asthma Immunol. Res. 10 , 52–61 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 27.

    Yang, Y. et al. Активация базофилов посредством стимуляции ASGM1 запускает высвобождение PAF и анафилаксический шок у мышей. евро. J. Immunol. 44 , 2468–2477 (2014).

    PubMed Google ученый

  • 28.

    McNeil, B.D. et al. Идентификация рецептора, специфичного к тучным клеткам, критически важного для псевдоаллергических реакций на лекарства. Природа 519 , 237–241 (2015).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • 29.

    Gao, Y. et al. Инъекция Shuang-Huang-Lian вызывает немедленную реакцию гиперчувствительности через C5a, но не через IgE. Sci. Отчет 8 , 3572 (2018).

    ADS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 30.

    Кишимото, Т. К. et al. Загрязненный гепарин, связанный с нежелательными клиническими явлениями и активацией контактной системы. N. Engl. J. Med. 358 , 2457–2467 (2008).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 31.

    Каплан А. П., Джозеф К. и Сильверберг М. Пути образования брадикинина и воспалительных заболеваний. J. Allergy Clin. Иннумол. 109 , 195–209 (2002).

    CAS Google ученый

  • 32.

    Джи, Н., Рао, Н., Гюнцель, Н. М., Аруланандам, Б. П. и Форстхубер, Т. Г. Анафилаксия и смертность, вызванные обработкой мышей антителом против VLA-4 и коклюшным токсином. J. Immunol. 186 , 2750–2756 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 33.

    Han, J. et al. Участие гистамина и RhoA / ROCK в реакциях гиперчувствительности немедленного типа на пенициллин. Sci. Отчет 6 , 33192 (2016).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 34.

    Бирчер А. Дж. И Ауэрбах М. Гиперчувствительность к внутривенным препаратам железа. Immunol. Allergy Clin. N. Am. 34 , 707–723 (2014).

    Google ученый

  • 35.

    Мерфи, Л. Дж., Хэчи, Д. Л., Оутс, Дж. А., Морроу, Дж. Д. и Браун, Н. Дж. Метаболизм брадикинина у человека in vivo: идентификация BK1-5 как стабильного пептидного метаболита плазмы. J. Pharmacol. Exp. Ther. 294 , 263–269 (2000).

    CAS PubMed Google ученый

  • 36.

    Патак М., Кайра Б. Г., Слэйтер А. и Эмсли Дж. Взаимодействие клеточных рецепторов и кофакторов системы контактной активации и фактора XI. Фронт. Med. (Лозанна) 5 , 66 (2018).

    Google ученый

  • 37.

    Каплан А. П. и Гебрехивет Б. Пути образования брадикинина в плазме и их взаимосвязь с комплементом. Мол. Иммунол. 47 , 2161–2169 (2010).

    CAS PubMed Google ученый

  • 38.

    Han, Y. et al. Нормальный диапазон и генетический анализ фактора свертывания крови XII в общей популяции Китая. Тромб. Res. 136 , 440–444 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 39.

    Han, E. D., MacFarlane, R. C., Mulligan, A. N., Scafidi, J. & Davis, A. E. Повышенная проницаемость сосудов у мышей с дефицитом ингибитора C1 опосредована рецептором брадикинина 2 типа. Дж.Clin. Расследование. 109 , 1057–1063 (2002).

    CAS PubMed Google ученый

  • 40.

    Матч, Н. Дж., Уотерс, Э. К. и Моррисси, Дж. Х. Иммобилизованные ионы переходных металлов стимулируют контактную активацию и стимулируют коагуляцию, опосредованную фактором XII. J. Thromb. Гемост. 10 , 2108–2115 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 41.

    Мюллер Ф. и Ренне Т. Новые роли системы активации плазменного контакта, управляемой фактором XII. Curr. Opin. Гематол. 15 , 516–521 (2008).

    PubMed Google ученый

  • 42.

    Фостер Т. Дж. Можно ли воскресить β-лактамные антибиотики для борьбы с MRSA ?. Trends Microbiol. 27 , 26–38 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 43.

    Johansson, S.G. et al. Пересмотренная номенклатура аллергии. Заявление о позиции EAACI от целевой группы EAACI по номенклатуре. Аллергия 56 , 813–824 (2001).

    CAS PubMed Google ученый

  • 44.

    Johansson, S. G. et al. Пересмотренная номенклатура аллергии для глобального использования: Отчет Комитета по пересмотру номенклатуры Всемирной организации аллергии, октябрь 2003 г. J. Allergy Clin. Иммунол. 113 , 832–836 (2004).

    CAS PubMed Google ученый

  • 45.

    Обтулович, К. Брадикинин-опосредованный ангионевротический отек. Pol. Arch. Med. Wewn. 126 , 76–85 (2016).

    PubMed Google ученый

  • 46.

    Памфри Р.С. Смертельная анафилаксия в Великобритании, 1992–2001 гг. Novartis Found Symp. 257 , 116–128 (2004).

    PubMed Google ученый

  • 47.

    Pumphrey, R. Anaphylaxis: Можем ли мы сказать, кто находится в группе риска фатальной реакции ?. Curr. Opin. Allergy Clin. Иммунол. 4 , 285–290 (2004).

    PubMed Google ученый

  • 48.

    Поулос, Л. М., Уотерс, А. М., Коррелл, П. К., Лоблей, Р. Х. и Маркс, Г. Б. Тенденции госпитализаций по поводу анафилаксии, ангионевротического отека и крапивницы в Австралии, с 1993–1994 по 2004–2005 годы. J. Allergy Clin. Иммунол. 120 , 878–884 (2007).

    PubMed Google ученый

  • 49.

    Ли, Дж. К. и Вадас, П. Анафилаксия: механизмы и управление. Clin. Exp. Аллергия 41 , 923–938 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • 50.

    Каплан А. П. Брадикинин-образующий каскад: историческая перспектива. Chem. Иммунол. Аллергия 100 , 205–213 (2014).

    PubMed Google ученый

  • 51.

    Банерджи А. Наследственный ангионевротический отек: классификация, патогенез и диагностика. Allergy Asthma Proc. 32 , 403–407 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • 52.

    Кристи, Г., Киттерингем, Н. Р. и Парк, Б. К. Конъюгаты лекарственное средство-белок-XIII.Расположение бензилпенициллоилгаптена, конъюгированного с альбумином. Biochem. Pharmacol. 36 , 3379–3385 (1987).

    CAS PubMed Google ученый

  • 53.

    Кастельс, М., Хан, Д. А. и Филлипс, Э. Дж. Аллергия на пенициллин. N. Engl. J. Med. 381 , 2338–2351 (2019).

  • 54.

    Чанг, К., Махмуд, М. М., Тойбер, С. С. и Гершвин, М. Е. Обзор аллергии на пенициллин. Clin. Rev. Allergy Immunol. 43 , 84–97 (2012).

    CAS PubMed Google ученый

  • 55.

    Кришна, М. Т. и др. Повышение эффективности использования антибиотиков путем борьбы с «ложной» аллергией на пенициллин. Clin. Exp. Аллергия 47 , 1362–1373 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 56.

    Торрес, М.J. et al. Контролируемое введение пенициллина пациентам с положительным анамнезом, но отрицательными кожными и специфическими сывороточными IgE-тестами. Clin. Exp. Аллергия 32 , 270–276 (2002).

    CAS PubMed Google ученый

  • 57.

    Трубиано, Дж. А., Адкинсон, Н. Ф. и Филлипс, Э. Дж. Стойкость реакции на пенициллин. JAMA 318 , 1714–1715 (2017).

    PubMed Google ученый

  • 58.

    Салкинд, А. Р., Кадди, П. Г. и Фоксворт, Дж. У. Рациональное клиническое обследование. У этого пациента аллергия на пенициллин? Доказательный анализ вероятности аллергии на пенициллин. JAMA 285 , 2498–2505 (2001).

    CAS PubMed Google ученый

  • 59.

    Менг, Дж., Терсфилд, Д. и Лукавска, Дж. Дж. Результаты теста на аллергию у пациентов, которые сами сообщили о наличии аллергии на пенициллин: двухлетний опыт. Ann. Allergy Asthma Immunol. 117 , 273–279 (2016).

    PubMed Google ученый

  • 60.

    Albin, S. & Agarwal, S. Распространенность и характеристики зарегистрированной аллергии на пенициллин у взрослого городского амбулаторного населения. Allergy Asthma Proc. 35 , 489–494 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 61.

    Гордон, Э. М., Дональдсон, В. Х., Сайто, Х., Су, Э. и Ратнофф, О. Д. Снижение титров фактора Хагемана (фактор XII) у жителей Востока. Ann. Междунар. Med. 95 , 697–700 (1981).

    CAS PubMed Google ученый

  • 62.

    Уилмот, Х. В., Хокли, Дж., Ригсби, П. и Грей, Э. Установление Всемирной организацией здравоохранения первого международного стандарта для фактора XII в плазме крови человека. Фронт. Med.(Лозанна) 5 , 46 (2018).

    Google ученый

  • Контактная система FINRA | FINRA.org

    Обзор

    Система контактов FINRA (FCS) была переработана и перенесена в Контакты в шлюзе FINRA в середине июля 2021 года. Обновление включает улучшенные рабочие процессы, легкий доступ к основным контактам сотрудников FINRA и интуитивно понятный внешний вид, соответствующий шлюзу FINRA. Чтобы узнать больше о контактах FINRA Gateway, посетите нашу страницу часто задаваемых вопросов.

    FCS помогает компаниям-членам сообщать в FINRA о своих ключевых контактах, что является требованием правил и подзаконных актов FINRA. Назначенные официальные контакты используются для облегчения голосования на выборах в FINRA, соблюдения различных правил и подзаконных актов, а также для улучшения взаимодействия FINRA с нашими фирмами-членами.

    Правило 4517 FINRA требует, чтобы фирмы:

    • оперативно обновлять всю контактную информацию, требуемую FINRA, через FCS при любых существенных изменениях;
    • ежегодно просматривает и проверяет контактную информацию; и
    • незамедлительно выполнит любой запрос о предоставлении контактной информации.

    Фирмы должны проводить ежегодную проверку своей контактной информации в течение 17 рабочих дней после окончания каждого календарного года.

    Чтобы обеспечить оптимальную доставку сообщений электронной почты FINRA, добавьте наш домен в список надежных отправителей в своем почтовом приложении. Ознакомьтесь с инструкциями по добавлению нашего домена в вашу электронную почту.

    Доступ к контактной системе FINRA (FCS)

    У вас должно быть надлежащее право от фирмы-члена FINRA для доступа к FCS.

    Если у вас возникли трудности с входом в систему FINRA, обратитесь за помощью к супер-администратору учетной записи (SAA) или администратору учетной записи (AA). Если вы являетесь SAA или AA и испытываете трудности со входом в систему, позвоните в информационный центр FINRA по телефону (301) 869-6699.

    Сведения о программе

    Справочная информация о FCS и связанных с ней уведомлениях.

    Инструкции и справка

    Инструкции по доступу к FCS и ресурсам для получения дополнительной помощи.

    Часто задаваемые вопросы

    Ответы на распространенные вопросы о редизайне FCS и переходе в раздел «Контакты шлюза FINRA».




    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *